人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定..docxVIP

人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定 作者：秦明春，王若光，秦莉花，刘小 丽，李春梅，刘惠萍 ，叶赞 【摘要】 目的 探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法，提高体外分离培 养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型，为体外研究血管内皮 细胞提供实验基础。方法 取2根脐带（至少20 cm）冲净淤血，采用加工穿 刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2 %胶原酶U,另一根用0.1 %胶原酶 I和0.25 %胰酶等比混合消化液，比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有 10 ng/mL的VEGFl勺培养基中培养，观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜 下观察细胞的形态学特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。 用流式细胞术观察细胞周期。结果 两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐 静脉内皮细胞，胶原酶U的消化效果稍优于混合消化酶，且比较理想的消化时 间均为13 min，细胞接种后4?5 h开始贴壁生长，1周左右可生长成单层， 光镜下呈多角形，“铺路石”样排列，免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人 第毗因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有 50.6%的细胞处于G0/G1 期。结论 胶原酶U和胶原酶I与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内 皮细胞的一种可取方法，而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液， 成功率高，可靠性大，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。 【关键词】 人