第四讲-细胞破碎-9.11-9.13解析.pptVIP

2021/3/26 * WSK卧式高效全能珠磨机 3. Crushing in ball mill 珠磨法 2021/3/26 * ZM系列卧式密闭珠(砂)磨机 2021/3/26 * 在珠磨法中,细胞的破碎率也能用一级速率方程式表示: ln[1/(1-R)]=Kt K－破碎速率常数 t－停留时间 R－破碎率 破碎速率常数K与许多操作参数有关,如搅拌转速、料液的循环流速、细胞悬浮液的浓度、玻璃小珠的装置和珠体的直径以及温度等。 2021/3/26 * 选择破碎方法的依据 细胞处理量:大规模生产多采用机械法（通用性强,破碎效率高）,实验室规模多选用非机械法（选择性好,固液易分离）。 细胞壁的强度与结构 目标产物对破碎条件的敏感性:对活性物质产品,要兼顾效率与稳定性。 破碎程度:操作条件要兼顾产物释放率、能耗和便于后提取。 2021/3/26 * 破碎率的测定 直接测定法——利用显微镜或电子微粒计数器直接计数破碎前后的细胞数（仅适合于机械法） 目的产物测定法——通过测定破碎液中目的产物的释放量来估算破碎率。（多用于生产,必须有100%破碎率作标准数值比较） 导电率测定法——细胞破碎后,大量带电荷的内含物被释放到水相,使导电率上升。（是一种快速测定法,应预先采用其他方法制定标准曲线） 2021/3/26 * 第四章 细胞破碎  Cell Disruption 2021/3/26 * 细胞结构 2021/3/26 * 动物细胞:大多无细胞壁,其培养产物大多分泌在培养液中。 植物细胞:多为胞内产物。 微生物:大多数小分子代谢产物分泌在胞外;大多数大分子产物和基因重组产物为胞内产物,如胰岛素、干扰素、白细胞介素-2等均为胞内产物。 对于胞内产物,首先必须将细胞破碎, 使产物得以释放,才能进一步提取。 2021/3/26 * 有些目标产物不在发酵液中,而是存在于生物体中。 基因工程菌产生的大多数蛋白质不会被分泌到发酵液中,而是在细胞内沉积。 脂类物质和一些抗生素也是包含在生物体中。 还有一些目标产物就是细胞本身,如面包酵母。 2021/3/26 * 使胞内产物释放出来一般需要破碎细胞壁,这也是这一章的主题。细胞破碎的方法在生物化学领域中得到了很广泛的运用,但多数在小规模生产中,在大规模生产尤其是基因工程中应用极少。 2021/3/26 * 概述 化学破碎方法 机械破碎方法 2021/3/26 * TABLE 4.0-1. Chemical Cell Disintegration Techniques Method Technique Principle Stress Cost Examples Chemical Osmotic shock Osmotic rupture of membrane Gentle Cheap Rupture of red blood cells Enzyme digestion Cell wall digested , providing disruption Gentle Expensive Egg lysosyme Solubilization Detergents solubilize cell membrane Gentle Moderate- expensive Bile salts acting on E.coli Lipid dissolution Organic solvent dissolves in cell wall Moderate Cheap Toluene disruption of yeast Alkali treatment Saponification of lipids solubilizes membrane Harsh Cheap * 2021/3/26 方法 技术 原理 效果 成本 举例 化学法 渗透冲击 渗透压破坏细胞 温和 便宜 血红细胞的破坏 酶消化法 细胞壁被消化,使细胞破碎 温和 昂贵 增溶法 表面活性剂溶解细胞壁 温和 适中 胆盐作用于大肠杆菌 脂溶法 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳 适中 便宜 甲苯破碎酵母细胞 碱处理法 碱的皂化作用使细胞壁融解 剧烈 便宜 2021/3/26 * Method Technique Principle Product Cost Examples Mechanical Homogenization (blade type) Cells chopped in Waring blender Moderate Moderate Animal tissue　and cells Grinding Cells rupture