培养基配制及适用性检查操作规程.docxVIP

题目 培养基配制及适用性检查共3 编码：0S- 操作规程 页 ZL037-02 批准 制定人 审核 人 制定日 审核日 批准 期 期 日期 颁发部 颁发数 生效 质量部 2份 门 量 日期 分发单 质量部 位 1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确 2范围：适用于微生物限度检查用培养基。 3责任人：质检员、化验主管。 4内容： 4. 1微生物限度检查用培养基的配制 4. 1.1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、牛皮纸、天 平、量筒。 4. 1 . 2根据配制量称取干燥培养基质，置搪瓷缸中，加入规定的纯化水或琼脂等使其溶解， 将搪瓷缸放到电炉上加热煮沸。 121 C高压灭菌15分钟。4. 1 . 121 C高压灭菌15分钟。 好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器中，灭菌条件为 4. 1.4 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 成分（g/L）蛋白胨氯化钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾重量1g4.3g3.56g7.23g方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16 成分（g/L） 蛋白胨 氯化钠 磷酸二氢钾 磷酸氢二钾 重量 1g 4.3g 3.56g 7.23g 方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液 16 克，加入 1000ml 纯化水中，微温溶 解，分装，115C高压灭菌 解，分装，115C高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干支试管中, 直接接种法缓 冲液9ml/管，试管口塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。 4. 1.5营养琼脂培养基 成分（g/L）蛋白胨氯化钠牛肉膏粉琼脂重量10g5g 成分（g/L） 蛋白胨 氯化钠 牛肉膏粉 琼脂 重量 10g 5g 3g 15g 33克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基 溶解，分装，121 C高压灭菌 33克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸 4. 1.6玫瑰红钠琼脂培养基 氯化钠5g磷酸二氢钾1.3g 氯化钠 5g 磷酸二氢钾 1.3g 成分（g/L） 重量 成分（g/L） 重量 胨 5g 葡萄糖 10g 硫酸镁 0.5g 磷酸二氢钾 1g 琼脂 14g 玫瑰红钠 0.0133g 方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基 30.5克，加入1000ml纯化水中，加热煮 沸溶解，分装， 121 C高压灭菌 15分钟备用。 4. 1.7胆盐乳糖培养基 成分（g/L） 重量 成分（g/L） 重量 胨 20g 牛胆盐 10g 乳糖 5g 磷酸氢二钾 4g 方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基 37克，加入1000ml纯化 水中，加热煮沸溶解，分装，121C高压灭菌20分钟备用。 4.1.8培养基配制注意事项： 采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基 pH进行校 验。 配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 培养基的分装量不得超过容器的 2/3，以免灭菌时溢出。包装 时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。 火菌后的培养基应保存在 2?25C，防止污染，可在 3周内用 毕；保存于密闭容器中，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不 宜过长，以免水分散失及染菌。 宜采用水浴加热熔化琼脂培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养 基，以免营养成份过度受热而破坏。 已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培养基不宜再用。 4.2 培养基的 适用性检查 4. 2. 1微生物限度检查中计数用培养基包括：(营养琼脂、玫瑰红钠琼脂)、控 制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。 4. 2. 2计数培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌(Escherichia coli ) [CMCC( B) 44102] 金黄色葡糖球菌(Staphylococcus aureus )[CMCC( B) 26003] 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis )[CMCC( B)63501] 白色念珠菌(Candida albicans ) [CMCC( F) 98001] 黑曲霉菌(Aspergillus niger ) [CMCC( F) 98003] 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC( B) 10104] 4.2.3检查方法 4.2.3.1培养基制备 按规定程序新鲜配制营养琼脂(被检培养基和对照培养 基)、玫瑰红钠培养基(被检培养基和对照培养基)、胆盐乳糖培养基，灭菌后备 用。 423.2营养琼脂培养基 4.2.3.2.1方法：取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、枯 草芽抱杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液(含菌50?100cfu )，另一平皿不接种菌 作为空白对照，倾注对照营养琼脂