基层兽医实验室开展禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验出(精).docxVIP

基层兽医实验室开展禽流感血凝（ 基层兽医实验室开展禽流感血凝（ HA） 和血凝抑制（HI）试验出现的误差分析与探讨 南金鱼 （酒泉市畜牧服务中心 甘肃 酒泉735000） 酒泉市肃州区南环西路 20号 摘要：禽流感血凝（HA ）和血凝抑制（HI试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年 来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流 感血凝（HA ）和血凝抑制（HI试验成为当前基层兽医实验室检测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确 性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。通过开展基层兽医实验室比对试验发现影响禽流感血凝（ HA） 和血凝抑制（HI试验的因素诸多，分析实验结果和关键操作步骤，总结试验误差，归纳岀从试剂配制、器材准 备和操作规范三方面改进完善试验。 关键词：禽流感；血凝抑制；结果误差；分析与探讨 禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常 用的方法。近年来，随着动物疫病防控形势的需要，禽流感疫病的日常监测、集中 监测和免疫抗体检测工作量逐年增加，禽流感血凝（ HA和血凝抑制（HI试验成为 当前基层兽医实验室检（监）测禽流感的唯一技术方法，其试验结果的准确性直接 影响着重大动物疫病防控策略的制定。 为探索试验操作技巧、提高实验结果准确性，我们对同 1组（9份）血清在7个县 级兽医实验室（实验室名称在下文分别以 A、B、C、D、E、F、G代替）开展了 抗体检测比对试验，发现在不同的实验室、不同的人员操作下出现不同的结果。根 据此次比对试验，笔者对影响基层兽医实验室开展禽流感血凝（ HA和血凝抑制 （HI ）试验结果准确性的因素进行了简单分析讨论，以供同行参考。 试验方法 1.1检测样品：血清样品1组（共9份，已知抗体滴度），根据实验需要将每份血 清分成等量的若干小份（每小份不少于 0.5ml）共50份，并重新编号后，随机组 合成7组血清盲样（每组10份血清，其中有3-4份重复）（血清盲样分配见表 一）。 1.2诊断试剂：同一生产批号的（哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号分别为 200901和200801）禽流感H5（HI标准抗原和标准阳性血清各 7份（诊断试剂分配 见表一）。 1.3材料准备: 1.3.1 96孔90°和1100V型微量反应板和不同型号微量移液器数把（配有滴头）， 各实验室自行准备。 P P 4 8 4 5 9 7 1.3.2阿氏(Alsevers)液、1%鸡红细胞悬液和pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液 (PBS),各实验室均按照《高致病性禽流感诊断技术》( GB/T18936— 2003)中 配制方法配置。 1.4检测步骤：按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936—2003)要求操作 (具体步骤略)。 组后 盲样 编号 ,52 3 7 9 1 1 o 8 5 梧 1份 份 1份 份 1份 份 标份 准抗原 1份 份 1份 份 1份 份 阳份 性血清 份 2 份 2 合份 2 计 P 流感的检测结果 4 4 品 编 号 样 准 滴 度 实 室 检 测 结 果 各 测 次 数 与 相 低高出 A B C D E F 同 滴 度 一现 滴其 度他 出 出 出结 现 现 现果 数 次 例 比 数 次 例 比 数 次 例 比 数 次 例 比 1 2 8 2 8 2 7 2 7 2 9 2 7 2 6 3% 3 0% 5 7% 2 2 7 2 5 2 7 2 0 2 6 2 0 2 10 2 7 41% 1 4% 1 9% 3 2 2 2 2 2 2 5 2 4 0 1 0 2 2 1 分析 分析 100%0%0%10210210100%0%802102107%o7%3%0090% 0% 0%9 10 0% 0% 0% 10 2 10 2 10 10 0% 0% 80 2 10 2 10 7%o 7% 3% 00 9 0% 0% 0% 9 0% 3 0% 7 0% 5 0% 2 4 2% 0% 8 0 0% 结果分析 2.1数据分析：50份血清盲样中，各实验室检测滴度与标准滴度完全一致的有 21 份，占检测数的42%;检测滴度比标准滴度低一个滴度的有 5份，占检测数的 10%;检测滴度比标准滴度高一个滴度的有 4份，占检测数的8%;出现其他较大 差距滴度的有20份，占检测数的40%;按照正常误差为±个滴度的标准计算，此 次比对试验检测合格30份，占检测数的60%。试验结果用SPSS软件进行方差分 析，表明差异显著（P0.05）。 2.2误差分析: 4倍（HAU ）抗原配制：此次试验中，血凝（HA试验即4倍（HAU抗 原配制在7个实验室出现了 4种配制比例。A和G实验室在第6孔（1:64 ）