生物化学表达调控-3-徐祥1.pptVIP

酵母双杂交原理 * 真核基因转录调节是复杂的、多样的 不同的DNA元件组合可产生多种类型的转录调节方式； 多种转录因子又可结合相同或不同的DNA元件 转录因子与DNA元件结合后，对转录激活过程所产生的效果各异，有正性调节或负性调节之分。 * （三）转录起始复合物的动态构成 （1）启动序列/启动子与RNA聚合酶活性 启动序列或启动子的核苷酸序列会影响其与RNA聚合酶的亲和力，而亲和力大小则直接影响转录起始的频率 * 一、转录水平的调控 * TBP TAFs (TF II D) TF II H P 真核RNA聚合酶Ⅱ在转录因子帮助下，形成的转录起始前复合物（PIC） （2）调节蛋白与RNA聚合酶活性 （三）转录起始复合物的动态构成 一、转录水平的调控 基因远端的增强子通过结合转录激活因子，并与共激活因子相互作用促进转录复合体的装配 * （1）hnRNA加工成熟的调节 在核内进行加工修饰，包括加帽、加尾、剪接、剪切修饰和编辑等。 （2）mRNA运输、胞浆内稳定性的调节 mRNA自身的特异序列与相关的调节蛋白相互作用 细胞核 细胞浆 * 二、转录后调控 -----影响mRNA的结构与功能 HG-* 三、翻译及翻译后调控 主要的调节点：起始阶段和延长阶段 （一）磷酸化修饰调节翻译起始因子活性 1. eIF-2α的磷酸化抑制翻译起始 * 三、翻译及翻译后调控 病毒蛋白质合成抑制 2. eIF-4E及eIF-4E结合蛋白的磷酸化和SUMO化激活翻译起始 * （一）磷酸化修饰调节翻译起始因子活性 三、翻译及翻译后调控 PAB mRNA cap eIF 4G 4A 4A 4E AUG （二）RNA结合蛋白调节翻译起始* RNA结合蛋白（RNA binding protein, RBP），是指那些能够与RNA特异序列结合的蛋白质。还参与转录终止、RNA剪接、转运、胞质稳定性等 * 三、翻译及翻译后调控 （三）对翻译产物水平及活性的调节* 蛋白质翻译后的修饰（功能）。 蛋白的降解（半衰期）。 前体：内源性发夹结构的转录产物 结构：长度约20-25个碱基（单链分子） 功能：通过与其靶mRNA 分子的3‘ 端非翻译区域（3’ UTR）互补匹配抑制mRNA翻译 靶mRNA结合：不需要完全互补 生物学效应：发育过程的调节 （四）非编码RNA对基因表达的调节 1．微小RNA (microRNA, miRNA) * 三、翻译及翻译后调控 Pri-miRNA (primary miRNA初级转录产物＞1kb) Drosha (1) pre-miRNA (precursor miRNA,miRNA前体, 约70 nt 双链) Dicer (2) 19-23nt组成的成熟单链miRNA miRNA的生成 miRNA与靶mRNA的作用模式 1. 二者不完全互补(配对)结合时，主要影响翻译过程而对mRNA的稳定性无任何影响。 2. 二者完全互补(配对)结合后，类似siRNA (small interfering RNA)与靶mRNA的结合，特异性的切割mRNA。 2. 干扰小RNA（siRNA） * 细胞内的一类双链RNA 前体：内源或者外源性双链RNA诱导产生 结构：长度21-23nt的双链分子 功能：降解mRNA 靶mRNA结合：完全互补 生物学效应：抑制转座子活性和病毒感染 三、翻译及翻译后调控 3. 长链非编码RNA在基因表达调控中的作用不容忽视 * 长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA) 长度超过200nt的RNA分子 不编码蛋白 lncRNA参与细胞内多种过程调控 种类、数量、功能都不明确 海绵机制（sponge） 三、翻译及翻译后调控 主要的调节点：起始阶段和延长阶段 翻译起始因子（eIF）活性的调节 RNA结合蛋白（RBP）对翻译起始的调节 对翻译产物水平及活性调节 非编码RNA对基因表达的调节 Peptide Chain * Summary: 翻译及翻译后调控 YL-* Summary Transcriptional control * 4 YL-* 名词解释： 顺式作用元件（cis-acting element ） 反式作用因子（trans-acting factor） 启动子（promoter） 增强子（enhancer） Homework * YL-* 本章小结： 掌握： 基因表达调控相关的基本概念、基本原理 影响基因转录激活的基本要素 原核生物的乳糖操纵子调控模式 真核生物转录起始复合物的形成 顺式作用元件和反式作用因子 理解：染色体结构与表达活化的关系 了解：siRNA和miRN