LCMS原理详细讲解.ppt

2021/3/27 * 大气压化学电离（APCI）特点 大气压化学电离也是软电离技术,只产生单电荷峰,适合测定质量数小于2000Da的弱极性的小分子化合物;适应高流量的梯度洗脱/高低水溶液变化的流动相;通过调节离子源电压控制离子的碎裂。 2021/3/27 * 电喷雾与大气压化学电离的比较 电离机理:电喷雾采用离子蒸发,而APCI电离是高压放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。 样品流速:APCI源可从0.2到2 ml／min;而电喷雾源允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min. 断裂程度;APCI源的探头处于高温,对热不稳定的化合物就足以使其分解. 灵敏度:通常认为电喷雾有利于分析极性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化合物,而APCI更适合于分析极性较小的化合物。 多电荷:APCI源不能生成一系列多电荷离子 2021/3/27 * 正负离子模式: 一般的商品仪器中,ESI和APCI接口都有正负离子测定模式可供选择。 根据样品的性质选择,也可两种模式同时进行 2021/3/27 * 质量分析器: 是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分,离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。 2021/3/27 * 质量分析器的分类: 双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 四极质谱仪(Q). 飞行时间质谱仪(TOF). 离子阱质谱仪（TRAP） 付利叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS). ┏四极+TOF（Q-TOF） 串列式多级质谱仪┫三重四极（QqQ） (MS/MS) ┗TOF+TOF 2021/3/27 * 进行MS/MS的仪器从原理上可分为两类 第一类仪器利用质谱在空间中的顺序,是由两台质谱仪串联组装而成。即前面列出的串列式多级质谱仪。 第二类利用了一个质谱仪时间顺序上的离子储存能力,由具有存储离子的分析器组成,如离子回旋共振仪（ICR）和离子阱质谱仪。但不能进行母离子扫描或中性丢失。 2021/3/27 * 实验室现有的质量分析器类型: 串联四极质谱仪(MS/MS) : 三重四极（QqQ） 离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器 MS1 MS2 Q1 q2 Q3 2021/3/27 * QqQ仪器可以方便的改变离子的动能,因此扫描速度快,体积小,常作为台式进入常规实验室,缺点是质量范围及分辨率有限,不能进行高分辨测定,只能做到单位质量分辨。（通过高分辨能得到化合物的分子式） 2021/3/27 * 在液质联机中使用的碎片化手段,能量都是以碰撞的形式输送给分子离子,这个能量足以使得处在能量亚稳态分子中的某些化学键断裂并使一些特定的分子发生结构重排。 2021/3/27 * 数据及供电系统 将接收来的电信号放大、处理并给出分析结果及控制质谱仪个部分工作。 从几伏低压到几千伏高压。 2021/3/27 * LC-MS分析条件的选择和优化 1.接口的选择: ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子,特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（如蛋白质） APCI不适合可带多个电荷的大分子,其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析。 2021/3/27 * 2.正、负离子模式的选择: 　选择的一般原则为: 正离子模式:适合于碱性样品,可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。 负离子模式:适合于酸性样品,可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团,如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。 2021/3/27 * 3.流动相的选择 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液,如甲酸铵、乙酸铵等,还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。 LC／MS接口避免进入不挥发的缓冲液,避免含磷和氯的缓冲液,含钠和钾的成分必须＜lmmol/l。（盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器）含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸铵＜10一5 mmol/l。 送样前一定要摸好LC条件,能够基本分离,缓冲体系符合MS要求。 2021/3/27 * 4.流量和色谱柱的选择 不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min,应用4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流,目前大多采用 l—2.1 mm内径的微柱,TI