结核病的实验室诊断.pptVIP

* * * * * 2021/3/26 * 痰标本（涂片阳性）GenoType MTBDRplus方法与比例法药敏试验结果比较 药物 GenoType MTB DRplus结果 比例法药敏结果 耐药 敏感 INH 耐药 63 0 敏感 1 129 灵敏度:98.4% (63/64) 特异度:100%(129/129) 符合率:99.5%(192/193) 2021/3/26 * 痰标本（涂片阳性）GenoType MTBDRplus方法与比例法药敏试验结果比较 药物 GenoType MTBDR plus结果 比例法药敏结果 耐药 敏感 RFP 耐药 39 12 敏感 2 140 灵敏度:95.1% (39/41) 特异度:92.1% (140/152) 符合率:92.7% (179/193) 2021/3/26 * 优点: Hain 技术可以快速检测RFP和INH的耐药 时间短、操作简单、安全高 特异性和灵敏度较高、重复性好 主观因素影响小、更为可靠 2021/3/26 * 缺点: 需要专门设备; 未发现所有的耐药突变位点,不能检测所有药物的耐药基因型; MTBDR plus试剂盒的检测试纸条,缺少ahpC-oxyR间隔序列范围,否则可进一步提高INH耐药检测的敏感性; 不能取代传统细菌学检测、只能作为参考。 2021/3/26 * 进行标本处理、实时PCR和利福平耐药性检测的完整平台 此平台由FIND和Cepheid（一个加州公司）所开发 痰标本可以直接放入模块中,而无需与任何试剂进行混合处理 GeneXpert 设备可进行标本液化、去污染、富集、DNA提取、 rpoB实时扩增、应用分子灯塔检测耐药相关的突变 该系统非常容易使用,不需要进行分子生物学培训 该检测方法另外一个特点是操作完全自动化,使用起来既容易又安全。 ②. Xpert MTB/RIF 2021/3/26 * 设计五个重叠的分子信标,检测81碱基 rpoB核心区域所有可能的突变 用不同的荧光基团标记每个分子信标,使仅在一个反应中完成整个检测成为可能 探针能检测野生型菌株（RIF-敏感人群）;ropB突变造成特定信标的信号丢失 （RIF-耐受人群） 每个探针必须:能检测野生型菌株;不能检测Rif耐药突变菌株,不能检测出非TB分枝杆菌. Xpert MTB/RIF的引物设计 2021/3/26 * Xpert MTB/RIF 2021/3/26 * WHO推荐 2021/3/26 * Xpert MTB/RIF 与 Hain的比较 : 只能做TB-DNA和利福平耐药基因; 只能通过8个缺失的野生型信号进行突变检测,不能探检测出现的突变信号; 样本通量少(4个/次）; 所需样本量大（1mL/次）; 仪器断电后只能重新开始; Hain有记忆功能。 维护:刚进入中国市场,故障后只能返厂修理,费用昂贵。 2021/3/26 * ③. DNA微阵芯片 基本原理:与Southern、Northern是一致的,都是应用已知核酸序列作为探针固定在玻璃等基片上,然后与待测样品的DNA或RNA互补的靶核苷酸序列杂交,从而获得待测样品的信息 2021/3/26 * 基因芯片的检测过程 2021/3/26 * 结核耐药快速检测基因芯片 * 结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒（DNA微阵列芯片法） 基于rpoB/katG/inhA的基因突变,快速检测分离株或者痰样本中结核分枝杆菌多药耐药（利福平、异烟肼） 通 量:两种一线抗结核药物、8个突变位点 速 度:6小时versus 传统 4~8 周 灵敏度: 103 CFU/反应 特异性:防污染体系;对照设计严谨;自动判读 利福平耐药 利福平敏感 结核耐药检测基因芯片 软件判读 激光共焦扫描仪 样品制备仪 杂交仪 发表文章:The International Journal of Tuberculosis and Lung Disease. 2009, 13(7): 914–920. 发明专利:申请号: 2.X。授权公告号:CN 101285062 B。 2021/3/26 * 1.晶芯?分枝杆菌核酸检测试剂盒 2.晶芯?十七种分枝杆菌菌种鉴定试剂盒 3.晶芯?分枝杆菌耐药检测试剂盒 4.晶芯?九项遗传性耳聋基因检测试剂盒 DNA微阵芯片 2021/3/26 * ④.探针熔解曲线技术 2021/3/26 * 检测结果判断 2021/3/26 * 2021/3/2