2021糖苷类化合物血浆蛋白结合的研究_刘斐.docxVIP

糖苷类化合物血浆蛋白结合的研究_刘斐 糖苷类化合物血浆蛋白结合的研究*刘斐1，2，张士俊1，徐为人1，申秀萍1，商倩1，汤立达1（1.天津药物研究院释药技术与药代动力学国家重点实验室，天津市新药设计与发现重点实验室，天津300193；2.天津中医药大学，天津300193）摘要：[目的]考察dapagliflozin 及其衍生物与大鼠血浆蛋白的结合规律以及结合位点。［方法］采用平衡透析法和高效液相色谱法（HPLC ）测定血浆蛋白结合率，选出代表性化合物与地西泮和华法林进行竞争性结合实验，利用对接计算进行结合位点的初步研究。［结果］dapagliflozin 的蛋白结合率随着血浆比例的增加而增大，糖苷类化合物结构变化对蛋白结合率也有一定影响，地西泮和华法林对糖苷类化合物的蛋白结合影响较小，对接结果表明糖苷类化合物主要与白蛋白的第2个亚结构结合。［结论］dapagliflozin 及其衍生物具有较高的血浆蛋白结合能力，可能结合在与华法林和地西泮不同的白蛋白结合位点，结构的变化可以一定程度改变蛋白结合率。关键词：糖苷类化合物；蛋白结合率；结合位点中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1６７２－１５１９（２０１３）１０-0621-05*基金项目：国家重大新药创制专项（2021ZX09401-009，2021ZX09401-307-1-1），天津科技支撑项目“新型SGLT2抑制剂”。作者简介：刘斐（1897-），女，研究生在读，主要从事抗肿瘤药和糖尿病治疗药的新药研发工作。通讯作者：徐为人，E-mail ：xuwr@/doc/7219b61158f5f61fb63666cc.html 。药物与血浆蛋白的结合是影响药物的分布、代谢和消除的重要因素，也是导致药物相互作用的重要因素，是新药评价不可缺少的指标。中国糖尿病（DM ）的患病率增长较快[1]，dapagliflozin 是高活性、高选择性的钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂，属一类新型降糖药物。有文献报道da －pagliflozin 与人的血浆蛋白结合率高达91%[2]，笔者参照dapagliflozin 合成了一系列的衍生物（TY702-5D 、TY702-10D 、TY702-5R1、TY702-5R2、TY702-C1），具有较好的降糖活性，本课题主要研究它们的血浆蛋白结合率，并探索可能的结合位点。1材料1.1仪器Waters-515高效液相色谱仪。TGL-16B 高速离心机（上海安亭科学仪器厂公司）。XW-80A 涡旋混合器（上海精科实验有限公司）；DH5000BII 恒温箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。半透膜（直径4.4cm ，长5m ，上海绿鸟科技公司，批。1.2样品与试剂dapagliflozin ，TY702-5D 、TY702-10D 、TY702-5R1、TY702-5R2、TY702-C1由天津药物研究院新药创新中心提供，地西泮（天津泽森化工有限公司，纯度99%），华法林（上海时代生物科技有限公司，纯度98%）。磷酸氢二钾（天津滨海新区科茂化学试剂有限公司）。1.3动物Wistar 大鼠，180~220g ，天津市山川红实验动物科技有限公司提供，许可证号：SCXK （津2021-0001）。2方法2.1空白透析液精密称取磷酸氢二钾14.110g ，磷酸二氢钾2.592g ，氯化钠1.991g ，加入950mL 蒸馏水中溶解，用0.1mol/L 的HCl 溶液调节pH 至7.4，并定容至1000mL 。2.2标准曲线各糖苷类化合物加甲醇制成浓度分别为10、20、50、100、200μg/mL 的标准样品溶液，取空白血浆200μL 或者空白透析液200μL ，分别制成模拟血浆侧和透过液侧的标准样品，待混合平衡后，模拟血浆侧取溶液100μL ，加入甲醇300μL ，涡旋混合30秒，以16114×g 离心10min ，取上清液，进行HPLC 分析，以面积作为纵坐标（Y ），浓度为横坐标（C ），线性回归，得到回归方程。2.3血浆样品回收率精密吸取200μg/mL 的各糖苷类化合物的标准溶液，至于5mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得150、100、20μg/mL 的标准液，从上述标准溶液中分别吸取100μL ，各加200μL 空白血浆，再加空白透析液稀释至15、10、2μg/mL ，同法再重复配置2份，待平衡后，取100μL ，加入甲醇300μL ，涡旋混合30秒，以16114×g 离心10min ，取上清液，进行HPLC 分析，以峰面积计算绝对回收率。DOI ：10.11656/j.issn.1672-1519.2021.10.152.4重现性和样品稳定性按血浆回收率方法制备浓