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FISH 技术在非小细胞肺癌中的应用 近年来在 NSCLC 的治疗上，化疗的地位虽然没有 发生根本动摇，但其疗效已达到一个平台，毒性和不良反应 也限制了临床应用。随着生物技术在医学领域的快速发展和 从细胞分子水平对发病机制的深入认识，肿瘤生物治疗已进 入了一个全新的时代。分子靶向治疗，指的是针对肿瘤细胞 里面某一个蛋白家族的某部分分子，或者是一个核苷酸的片 段，或者一个基因产物进行治疗。分子靶向治疗是目前肿瘤 治疗的一个“闪光点” ，凭着它的特异性和有效性，已取得 很大成功，是目前国内外治疗的“热点” 研究表明， 50% NSCLC 的发生是由于一系列的驱动基 因，包括 EGFR 、 KRAS 、ALK 、Akt、MEK 、 PI3K 、 BRAF 等，其中最常见的为 EGFR 和 KRAS 突变。 肺腺癌作为占据 NSCLC 总数 50%以上的大户，是最常见的组织亚型。肺腺 癌可以根据相关驱动基因突变进一步细分成更多的亚群（图 1）。截止目前，这些驱动基因包括 1）。截止目前，这些驱动基因包括 EGFR 、 KRAS 、 HER2 、 PIK3CA 、BRAF 基因突变、 MET 基因扩增和 ALK 、 ROS1、 RET 基因重排。 鳞状细胞癌在 NSCLC 中排名第二，大约占 20-30%。鳞 状细胞癌中， EGFR 基因突变非常罕见，只有成纤维细胞生 长因子受体 -1（FGFR1 ）的基因扩增，盘状结构域受体 2 DDR2 ）基因突变和 PI3KCA 基因的扩增和突变比较常见 图 1 ）。针对上述变异的靶向治疗药物在临床上也确实非常 有效。图 1：非小细胞肺癌遗传变异的简要情况（引自《晚 期非小细胞肺癌的靶向治疗（综述）》，丁香园，作者张波， 期非小细胞肺癌的靶向治疗（综述） 》，丁香园，作者张波， 2015-03-05) 其中指南推荐检测 ALK 、ROS1、RET 基因重排和 MET 基因扩增靶向治疗的方法为荧光原位杂交（ FISH ）技术。 EML4-ALK 基因重排 ALK 基因最初是在间变性 T 细胞淋巴瘤和炎性成纤维 细胞瘤中发现。 目前已发现其参与形成的融合基因 （X-ALK ） 与多种肿瘤的发生密切相关。 2007 年 Soda 等首次发现 EML4-ALK 融合基因存在于部分 NSCLC 中。 EML4 与 ALK 定位于 2 号染色体短臂上， 但两者方向相 反，相隔 12 Mb ，融合时须 EML4 或 ALK 其中之一反向与 对方连接， EML4-ALK 基因亚型取决于两者断裂相接的位 置，因此 EML4 断裂点呈现出多变性，目前已检测到的断裂 点有 2、6、13、14、15、17、18、20 号外显子，这些形成 了至少 11种 EML4-ALK 融合基因亚型，已有实验证实它们 成为继表皮生长因子受体（ EGFR ）后另一种有明确疗效预 测作用的分子标志物，它被证实是 NSCLC 发生发展过程中 独立而又关键的分子靶点，在 NSCLC 中的发生率约为 5%。 中的大部分能促进肿瘤生成EML4-ALK 融合基因有望 中的大部分能促进肿瘤生成 EML4-ALK 融合基因有望 克唑替尼是一种 ATP 竞争性酪氨酸激酶小分子抑制剂， 可特异性靶向抑制 ALK 激酶，也可抑制 c-MET 和 ROS1 等 信号通路。 临床试验显示对于 ALK 阳性的进展期 NSCLC 患者，克 唑替尼的疗效显著优于传统化疗，二线单药治疗患者的中位 无进展生存期（PFS）为7.7个月，有效率达到 65.3%。 基于其良好的疗效和耐受性， 2011 年美国药品食品管理 局（ FDA ）批准克唑替尼用于治疗 ALK 阳性的进展期非小 细胞肺癌。 2012 年克唑替尼获得欧盟批准， 用于进展期非小细胞肺 癌。 2013 年初，中国食品和药品监督管理总局（ 2013 年初， 中国食品和药品监督管理总局（ CFDA ）批 准克唑替尼（赛可瑞）用于治疗 ALK 融合阳性的局部进展 期或转移性 NSCLC 患者。 色瑞替尼是第二代的 ALK 抑制剂，可用于初治的或克 唑替尼治疗失败的 ALK 阳性肿瘤。 2014 年， FDA 批准色瑞 替尼用于 ALK 阳性的转移性非小细胞肺癌和克唑替尼治疗 失败的非小细胞肺癌患者。 ROS1 基因断裂 ROS1 全称 c-ros 原癌基因，是一种跨膜的受体酪氨酸激 结肠酶基因。在成人的肾脏、小脑、外周神经组织、胃、小肠和 中 ROS1 蛋白表现为高表达状态，而在其它组织中表现 结肠 为低表达。但在正常的人肺组织中，到目前为止还没有发 为低表达。 但在正常的人肺组织中，到目前为止还没有发 现 ROS1 蛋白表达。研究显示， ROS1 染色体的重排可以激 活 ROS1 激酶活性。 约有 1-2％的 N