基因敲低对人乳腺上皮细胞增殖及信号通路的影响.docxVIP

辽宁师范大学硕士学位论文摘 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 钾离子通道是种类最多、分布最广的一类离子通道，在可兴奋细胞、非可兴奋细胞 的信号转导过程中起着极其重要的作用，参与细胞的增殖和分化等过程。Kvl．5钾通道 (又称为KCNA5)是由KCNA5基因编码的蛋白，属于电压依赖型钾离子通道。自1990 年首次从鼠脑内克隆成功后，人们陆续发现它广泛表达在脑、心脏、肝脏、肾等组织和 器官以及多种肿瘤细胞中。研究表明，Kvl．5钾通道与乳腺癌的发生、发展有着密切的 关系。因此，研究Kvl．5在乳腺细胞增殖中的作用及机制，进一步探讨Kv钾通道作为 乳腺癌治疗的靶标，对临床预防和治疗乳腺癌具有重要的意义。 研究表明，许多类型的细胞的Kvl．5钾通道与胞膜窖或窖蛋白．1(Caveolin．1，Cav．1) 存在紧密联系。本室前期工作表明，人乳腺上皮细胞MCFl0A中Kvl．5与Cav．1蛋白含 量均显著多于人乳腺癌细胞MCF．7，这提示我们，Kvl．5钾通道可能与Cav一1相互联系， 影响乳腺细胞增殖。本文利用RNAi技术建立Kvl．5基因敲低的稳定传代细胞模型 MCFl0AKvL5(～，采用细胞计数法、免疫印迹、免疫荧光等方法研究Kvl．5在乳腺细胞信 号转导和增殖过程中的作用及Kvl．5与Cav．1的相互作用关系，旨在探讨Cav．1与Kvl．5 相互作用调节增殖相关信号通路控制乳腺上皮细胞增殖的机制。 结果： (1)利用RNAi技术建立了Kvl．5基因敲低的人乳腺上皮细胞模型MCFl0AKvl‘5(～，发 现Kvl．5基因敲低后，细胞倍增时间延长，PCNA蛋白表达明显下调，细胞增殖受到抑 制。 (2)利用免疫印迹杂交技术研究Kvl．5基因敲低对MAPK和Akt通路激活的影响，发 现Kvl．5基因敲低显著抑制MCFl0A细胞内Akt信号通路的激活，促进MAPK与Akt 信号通路的交叉对话。 (3)利用Kvl．5基因敲低的细胞模型MCFl0AKvl‘5(。)和Cav．1基因敲低的细胞模型 MCFl0AcE研究Kvl．5与Cav．1之间的相互作用，发现MCFl0A细胞内Cav．1与Kvl．5 相互作用共同分布于胞膜窖，Cav．1基因敲低抑制Kvl．5在膜上的表达和分布。 结论：Kvl．5基因敲低抑制人乳腺上皮细胞MCFl0A增殖，并通过与Cav．1相互作 用抑制Akt信号通路的激活。 关键词：Kvl．5；Cav-1；PI 3K／Akt信号通路 Kvl．5基因敲低对人乳腺上皮细胞增殖及Akt信号通路的影响Effects Kvl．5基因敲低对人乳腺上皮细胞增殖及Akt信号通路的影响 Effects of Kv 1．5 gene knock-down on proliferation mediated by Akt signaling pathway in human mammary epithelium cells MCF 1 0A Abstract K十channel is the most abundant and widely distributed ion channel．It plays a major role in the signal transduction pathway of excitable cells and unexcitable cells and involved in cell proliferation and differentiation etc．Kvl．5 channel(also named KCNA5)is encoded by KCNA5 gene，which belongs to the family of voltage-gated ion channel．Since 1 990，it has been cloned from rat brain for the first time，KVl．5 was found in many tissues including brain， heart，liver，kidney and some of their malignant counterparts．Many reports indicated that Io 1．5 is correlated closely to the generation and development of breast cancer．Thus，research on Kvl．5 mechanism in cell proliferation and further investigation of Kvl．5 as therapeutic target is important to clinical preve