核磁共振实验技术新进展 教学PPT课件.pptx

核磁共振实验技术的新进展1、谱仪向高场发展核磁谱仪场强的不断升高，从某种程度上增加了NMR的灵敏度和分辨率。如每隔几年都有很大的变化87年有了600兆，90年～91年700兆，94年有了第一台750兆，98年800兆，2000年10月第一台900兆获得NMR谱图。2、实验方法的最新进展 由谱仪硬件的发展，用多通道谱仪可以成功的实现三维谱和C、H、N相关谱，使研究大分子的分子量做到10万以上。如感兴趣可以查一下文献。3、探头的改进 探头线圈材料的改进提高了测试样品的灵敏度，如反式H-X多核探头，十多年前1H的信噪比为450：1，而现在的信噪比可达850：1以上，几乎提高了一倍，从提高灵敏度设计为思路，近几年来的Nano探头和超低温探头发展最快。1）魔角旋转探头（Nano探头） 在固体中自旋之间的耦合较强，共振谱较宽，掩盖了其他精细的谱线结构，耦合能大小与核的相对位置在磁场中的取向有关，其因子是(3cos2β-1)，如果有一种方法使β=θ=54.440（魔角），则3cosβ-1=0，相互作用减小，达到了窄化谱线的目的。魔角旋转技术就是通过样品的旋转来达到减小线宽因子相互作用的，当样品高速旋转时β与θ的差别就会平均掉。超微量探头的结构原理 Nano NMR Probe内腔长28mm，魔角（54.7°），转速在1.5~2.0kHz之间，为保持长期稳定性，带有2H锁线圈，并有变温功能，探头种类有直接检测用的1H和13C{1H}和间接检测用的1H{13C}探头，样品体积最大为40μL，可取得线形好，灵敏度高和分辨率最佳的谱图，若样品量很少，溶剂量可相应减少，保持样品有一定浓度，溶剂杂质及伪峰不会增加，还可提高动态范围，只要氘代试剂的量能保证场一频联锁，即使样品溶液体积未充满整个样品管（40μl），也不会使匀场变坏，或使谱线变宽，确保取得高质量的谱图。 Nano NMR Probe的应用样品量不同的薄荷醇,分别为为40μg、4μg和400ng，溶于CD2CL2中,采样次数分别为4次,400次和32240次微量样品的测定比较 组合化学中的应用 组合化学是近二十年发展起来的一种快速合成与筛选大量化合物的新方法，其在发现和优化药物先导化合物的过程中发挥了重要作用。组合化学包括了组合合成、群集筛选和对感兴趣化合物结构解析的三大步骤。因而有“平行”合成技术、“混-分”合成技术、编码-解码技术、“一珠一化合物”技术、“位置扫描”技术、天然寡聚物的生物组合合成及筛选技术、“动态化学库”技术 、“多样性”导向的组合合成技术 、“Microarray”技术、组合配基装配、“非天然”天然组合化学库合成技术等等。 在多种合成方法中，“一珠一化合物”技术最大的优点是化学库的空间可分离性，亦即化学库中所有的化合物同时并存且相互独立，因而，这种树脂珠-化学库的方式可直接用于固相筛选法。 利用该技术在短时间内迅速合成并筛选的化合物可以达到几千万这样的天文数字，大大加快了发现药物先导化合物的步伐。但是在产物分析中，由于树脂引起磁场的不均匀，常规的NMR技术受到了限制。较早的做法是将反应的中间体或最终产物从树脂上切落下来，再利用常规方法进行分析和鉴定。这种方法费时，费样，而且经常破坏化合物的结构，得出错误的信息。 九十年代初发展的高分辨魔角核磁共振技术(High resolution magic angle spinning (HR/MAS)NMR) 可以克服树脂引起的磁场不均匀性 ,得到最高灵敏度和最小线宽的NMR谱图。该技术不破坏样品，可灵敏、直接地提供偶联在树脂上化合物的结构信息。 组合化学中的应用顶部谱图： 用常规5mm液体高分辨探头 91．1mg干树脂，扫描一次。中部谱图：用常规5rnm固体CP／MAS探头，树脂样品为20.2mg．转速为3.8kHz，扫描8次底部谱图：用Nano探头，树脂用量仅为5.4mg，魔角转速为2kHz，扫描8次目前，广泛用于监测固相合成反应；指导反应条件的优化; 鉴定固载在单一树脂珠上化合物的结构；以及分析树脂上固载化合物的构象等等。高分辨魔角核磁共振是组合化学中有用的分析工具，可以跟踪固相有机合成反应，快速直接地提供连在树脂上的化合物的结构信息，指导反应条件的优化，它能直接简便地定量反应的产率，而这种分析方法恰恰在常规NMR中难以实现。 2）3mm，1.7mm微量探头原理是提高样品浓度解决灵敏度问题。可提高灵敏度2倍左右。3）超低温探头（液氦） 利用高温超导薄膜材料而制成的超导低温探头，当样品温度由温控单元维持时，采用闭环或开环制冷系统使超导线圈冷到25K，消除了实验谱图的电噪声，提高了检测灵敏度。是常规探头的四倍。相对常规5mm探头而言，其潜在灵敏度可以提高8～10倍。国内已有此类探头使用，500兆信噪比可达到3500：