核磁共振实验技术方法特点和选择 教学PPT课件.pptx

核磁共振实验技术、方法、特点和选择1.1核磁共振氢谱核磁共振氢谱的分析大体上可以分为以下三个步骤：①看峰的位置（即化学位移）和峰的面积（即氢原子数目）：应用化学位移的知识，结合谱峰面积，可以确定（或大致确定）化合物中含氢官能团的种类。②看峰的形状（即各个峰的偶合裂分情况）：应用n+1规律或二级偶合裂分的知识，可确定（或大致确定）分子中基团和基团间的相互关系，区分出自旋体系的种类。③计算偶合常数：应用偶合常数的知识，可以确定分子的立体构型等。实验技术、方法、特点和选择1.2 13C-谱 以单脉冲检测高频振荡的13C信号，对1H质子全去偶，得到碳谱。优点： a、信息量大，碳原子构成了有机化合物的骨架，掌握有关碳原子的信息在结构鉴定中有重要意义，从这一角度看，碳谱的重要性大于氢谱。例如：六取代苯环、乙烯四取代饱和碳原子的取代等，从氢谱上是不能得到直接信息的。 b、分辨好。常见有机化合物氢谱的δ值很少超过10ppm，而碳谱的变化范围可超过200ppm，由于碳谱的化学位移变化范围比1H谱大十多倍，化合物结构上的细微变化可望在碳谱上得到反映。这是氢谱不能比的。实验技术、方法、特点和选择1.2 13C-谱 缺点： 灵敏度小。自然界中的碳元素大部分是自旋比为零的12C（~98.9%），13C为1.1%，加上旋磁比只是1H的1/4。核的NMR信号强度有一公式可以反应13C的灵敏度。 S/N ∝ m?γ3, m: 原子核和数目（丰度），γ 是旋磁比。13C与1H比较。13C总的观测灵敏度只有大约1H的1/6400，通常的实验条件下，若不进行长时间的累加测定13C谱至少需要数十毫克样品。但是随着谱仪的进步，灵敏度提高，用量减少，13C发挥越来越大的作用。 检测时间长。13C谱通常记录的是质子去偶谱，把质子偶合引起的多重线合并为一条线，加上NOE效应可将灵敏度提高一个数量级，但丢失了所有C-H偶合信息。13C谱图实验技术、方法、特点和选择1.3 DEPT实验（Distortionless Enhancement by Polarization Transfer）为了得到既提高灵敏度又使强度不畸变的谱，发展了一种巧妙的极化传递方法，称作DEPT方法。碳的多重线具有正常的强度比和理想的相位。在发展期能明显减少由横向驰豫而损失的磁化量。利用光谱编辑法能得到区分CH，CH2和CH3信号做DEPT谱，但这样需要分别进行三次测试（即45°，90°，135°）。不同杂化类型碳的1JCHSP3:125HZ, SP2:165HZ, SP:250HZ 1JCH =140Hz实验技术、方法、特点和选择1.4 NOE差谱和NOESY 1D谱测试NOE谱在研究分子中核或基团空间排列的信息有着非常重要的地位。 NOE是核的驰豫问题，是结构化学中一个很重要的物理现象。产生NOE原因是 : 由于两个质子(Ha,Hb)的空间位置很近，达到饱和的Hb通过横向弛豫将能量传给Ha，于是Ha吸收的能量增多，共振信号增大。 空间距离相近是发生NOE效应的充分条件，与两核之间相隔的化学键数目无关。 NOE的大小与两核间距离的6次方成反比，一般超过5?就观察不到了。因此，NOE对于研究空间结构十分有用，是立体化学研究的重要手段。实验技术、方法、特点和选择1.4 NOE差谱和NOESY 1D谱 具体操作： 当以某种方式干扰一个跃迁谱线时，与此核有偶极一偶极作用的另一个核的跃迁谱线强度发生了变化，叫做NOE效应。它不取决于标量偶合是反映偶极间的直接磁性偶合作用。通过NOE的研究，人们可获得偶极一偶极偶合信息，最终与核间距分子运动和分子的立体结构关联。具体谱图的实现为: ①作一个H谱 ②选择照射点 ③选择对照点 ④用程序进行长时间累加。注意：样品的处理：除气（氧气）（通氮气），过滤，保持仪器稳定性，匀场要好等。 用整形脉冲也可进行NOESY 1D谱实验，灵敏度和选择性比NOE差谱好。用途：立体空间结构，构型分析NOESY 1D谱in CDCl3NOESY 1D谱in CDCl32、二维谱图（2D-NMR）1971年比利时科学家J. Jeener首次提出二维谱的思路1974年-1975年，R.R.Ernst对二维核磁共振波谱从理论到实验进行了仔细的研究。1976年， R.R.Ernst用密度算符对2DNMR原理进行了理论阐述。1976年以后，2D-NMR技术得到了非常迅速的发展。1979年，2D-NMR技术应用与蛋白质的研究，2D-NMR技术已经成为研究复杂有机化合物和生物大分子不可缺少的工具。所有2D NMR实验可用以下术语描述： 准备期（D1）-发展期（t1）-混合期（τm）-检测期（t2）准备期是为了使磁化矢量达到适当的初始状态而设置的，接着在发展期控制磁化矢量的运动，然后在检测期检测信号