化学实验中大孔吸附树脂性质及使用.ppt

取D1300树脂100ml置树脂床上，加入浓度为0.51g/ml的药液，并控制药液上样流速为24／1000(V/min，V为树脂床体积)，径高比为1:40，每2.0ml收集一份，薄层检测后，选择不同馏分定量测定右归煎液中有效成分5-HMF(5-HMF为方中熟地黄成分)斑点的峰面积，见图1，泄漏曲线见图2。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 扫描结果显示，第111分峰面积高于110分峰7.48倍，明显表现出泄露现象，按每2.0mL计算，总上样体积220.0mL相当于110.0g生药量，由计算公式： 树脂吸附容量＝泄露点前上柱样品体积(m1)X样品浓度(mg／L) 可得出该树脂对右归煎液的吸附容量，即每lml树脂最大吸附量为1.10g生药。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 2. 药液上柱前的预处理 为避免大孔树脂被污染堵塞，药液上柱前一般需经过滤，除去较多的悬浮颗粒杂质，保证树脂的使用完全、顺利。 3 . 上柱工艺条件的筛选 ①影响树脂吸附性能的因素有诸多方面，其中最基本的是树脂自身因素，包括树脂的]骨架结构、功能基性质及其极性等。此外，样品浓度、pH、吸附柱径高比及上样流速等条件，均不同程度地影响树脂的吸附性能。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 ②上样溶液pH值对吸附和分离效果至关重要，根据化合物结构特点，灵活改变溶液pH值，可使提纯工作达到理想效果。一般情况下，酸性化合物在适当酸性溶液中充分被吸附，碱性化合物则在适当碱性条件下较好地被吸附，中性化合物可在大约中性的条件下被吸。 ③药液浓度、流速及树脂柱径高比等因素也直接影响了大孔吸附树脂的吸附性能。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 四、 树脂的解吸 解吸时，通常先用水，继而以醇—水洗脱，逐步加大醇的浓度，同时配合适当理化反应和薄层层析(如硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析及HLPC等)作指导，洗脱液的选择及其浓度、用量对解吸效果有着显著影响。如在赤芍总苷生产工艺条件研究时发现，在用大孔吸附树脂进行分离、解析时，先用水洗脱至还原糖反应显阴性(Molish反应检测)，改用10％、20％、30％、50％、95％浓度的乙醇梯度洗脱，结合高效液相色谱法检测，发现10％、20％乙醇洗脱液中均含有芍药苷，而30％以上浓度的乙醇中未检出，故选用30％乙醇洗脱，即可将柱上的芍药苷全部解吸。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 又如对银杏叶提取物的生产工艺条件进行研究，发现最开始用水，后来用醇洗脱时，洗脱液的用量、浓度均对产品中黄酮含量和收率有影响。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 对于复方样品，为防止同类化合物不同结构物质的漏洗，应选择适当的洗脱液，并有相关的方法加以检测和证明，如50％乙醇对小檗碱洗脱率为96.86％，但不能将同时存在的延胡素乙素洗脱解吸下，故复方中含同类成分不同结构的物质，宜用不同洗脱剂解吸。洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯。根据吸附力强弱选用不同的洗脱剂及浓度。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 对非极性大孔树脂，洗脱剂极性越小，洗脱能力越强；对于中性大孔树脂和极性较大的化合物来说，则用极性较大的溶剂洗脱较为合适。为达到满意的效果，可设几种不同浓度的洗脱剂，确定洗脱浓度。实际工作中，甲醇、乙醇、丙酮应用较多，流速一般控制在0.5～5ml／min为好。 根据吸附力强弱选用不同的洗脱剂及浓度。对弱碱性化合物，如生物碱类，则用酸性洗脱剂，解吸效果较为理想。例、如小檗碱的洗脱，分别以50％、70％甲醇与含0.5％硫酸的50％甲醇洗脱，用薄层色谱法检测，表明后者有较好的洗脱、解吸能力。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 对弱碱性化合物，如生物碱类，则用酸性洗脱剂，解吸效果较为理想。例、如小檗碱的洗脱，分别以50％、70％甲醇与含0.5％硫酸的50％甲醇洗脱，用薄层色谱法检测，表明后者有较好的洗脱、解吸能力。 解吸效果的评价：根据洗脱曲线，选择洗脱峰最集中的条件，如喜树碱的不同洗脱剂的洗脱曲线见图。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 五、. 树脂的再生 大孔吸附树脂的一大优点就是可再生供重复使用。由于树脂再生后的性能影响到下一轮的纯化分离，故需建立评价树脂再生是否合格的指标与方法，证明树脂经多次反复再生后其纯化效果保持一致。 化学实验中大孔吸附树脂性质及使用 1. 树脂再生的方法 一般用无水乙醇或95％乙醇洗脱至五色后，树脂柱即已再生。然后用大量水洗去醇，可用于相同植物成分的分离。若树脂颜色变深，可试用