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资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 生物技术药物总结 第一讲 总论 生物技术药物 (BiotechdrugsorBiopharmaceuticals) : 指采用生物技术生产的用于疾病的预防、 治疗和诊断的制品。 生物技术 : 指以现代生命科学为基础 , 结合其它基础科学的科学原理 , 采用先进 的科学技术手段 , 按照预先的设计改造生物体或加工生物原料 , 为人类生产出所需产品或达到某种目的。 主要包括 : 基因工程、 细胞工程、 酶工程、 发酵工程、 蛋白质工程、 抗体工程。 生物技术药物分类 ( 按化学特性 ) : 天然生物技术药物 ; 重组活性蛋白、 多肽 ; 基因药物 ( 核酸药物 ) 第二讲 基因工程基本过程与方法 ( 一) 原核表示载体 ( 大肠杆菌 ) 功能元件 : 启动子及调控序列、 核糖体结合位点、 松弛 型复制子、 转录终止区、 多克隆位点、 筛选标记 哺乳动物细胞表示载体功能元件 : 原核 DNA 序列、 启动子、 终止子和多聚腺苷化 信号、 拼接信号、 筛选标记 第三讲 基因工程基本过程与方法 ( 二) ——基因文库的构建、 基因工程中的常见 酶、 DNA 测序 cDNA  文库 :  指经过克隆的方法保存在宿主中的一群混合分子  , 这些分子中的插 入片段的总和可代表某种生物全部  mRNA  序列。 cDNA  基因文库构建的步骤  : ①细胞总  RNA  的提取和  mRNA 的分离  ; ②第一条  cDNA  合成 : oligo(dT) 引物引导的  DNA  合成法、 随机引物合成法、  特定 寡核苷酸引物合成法  ; 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 ③第二条 cDNA 合成 : 自身引物合成法、 置换合成法、 外加引物合成法④双链 cDNA 克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖 限制性核酸内切酶 ( 同尾酶 ) : 一类能识别双链 DNA 分子中的特定核苷酸序列并能切割 DNA 双链的核酸内切酶。 识别序列特点 : 多数具有严格的识别序列 ; 识别序列的长度 :4~8 个碱基对 ; 序列 特征 : 回文序列 第四讲 基因工程基本过程与方法 ( 三) ——细胞转化与转染连接子导入受体细胞 : 转化 : 将质粒或 DNA 导入宿主细胞 , 引起细胞遗传的改变。 转染 : 真核细胞的转化 转导 : 经过噬菌体 (或病毒 )将宿主基因从一个细胞转移到另一个不同基因型的细胞 中。 ※常见方法 : 原核细胞 : CaCl2 感受态法、 噬菌体体外包装法 真核细胞 : 电穿孔法、 DNA- 磷酸钙共沉淀法、 脂质体介导法、 显微注射法 CaCl 2 感受态法 : 适用于革兰氏阴性细菌。 原 理 : 是钙离 子 与 细菌 外 膜磷 脂 在低 温 下形 成液 晶 结 构 , 后 者 经热 脉 冲 ( HeatShock)发生收缩作用 , 使细胞膜出现空隙 , 使 DNA 分子能够经过。 优点 : 操作方便 缺点 : 转化效率较低 重组体克隆的筛选与鉴定 : 抗药性标记筛选、 ※兰 -白斑筛选 ( α -互补 ) 、 DNA 电 泳检测 α-互补 : 将缺陷α -半乳糖苷酶 N 端部分序列的质粒载体转入缺陷α -半乳糖苷酶 C 端部分序列的宿主菌 , 而且在含有 X-gal 的培养基上选择性培养 , 用乳糖类似物 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 IPTG 作为安慰性诱导剂进行诱导。 质粒转入宿主菌后 , 宿主与质粒产生的有缺陷的α -半乳糖苷酶之间能够形成互补 , 对 X-gal 进行降解可产生蓝色菌落 , 这就是 -互补现象。定点突变 : 1、 盒式诱变 : 利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段 , 取代野生型基因 中的相应序列。 2、 寡核苷酸引物诱变 : 指应用合成的寡核苷酸片段作为诱变剂 , 诱发基因或 DNA 片段中特定位点发生突变的技术。 3、 PCR 诱变 寡聚核苷酸介导的突变 盒式突变 PCR介导的突变 优点 保真度高 简单易行 操作简单 突变效率高 突变成功率高 缺点 突变效率相对低 受到酶切位点的限制 后续工作复杂 操作复杂 TaqDNA聚合酶保真性偏低 周期长 第五讲  原核表示系统 启动子  ( promotor)  : 是  RNA  聚合酶结合并启动转录的特异  DNA  序列。 核糖体结合位点  ( RBS) : 遗传信息翻译成多肽链起始于  mRNA  上的核糖体结合 位点 ( RBS) 。它是起始密码子 AUG 上游的一段非翻译区序列。 常见的启动子转录调控系统 1、Plac 转录调控系统 : 弱 ,I