的表达载体构建及其在胰腺癌细胞中抑制作用的初步探讨.docxVIP

中文摘要背景：胰腺癌是发病率高、预后差、死亡率高的恶性肿瘤，它发生转移早，手 中文摘要 背景：胰腺癌是发病率高、预后差、死亡率高的恶性肿瘤，它发生转移早，手 术切除困难，对放化疗不敏感。因此，寻找新的肿瘤标记和基因治疗方法有十分重 要的意义。miRNA是一种长度为21--25bp的单链非编码RNA，不编码蛋白质，功 能为负调控转录后水平的基因表达，进而调节细胞的代谢、增殖、分化和凋亡等过 程。K-RAS是一原癌基因，在胰腺癌中90％以上的病例中有突变，已有证据表明在 肺癌中受miRNA作用，如let一7【6’7】。近年的研究发现胰腺癌中miRNA表达谱与慢性 胰腺炎和正常胰腺中有很大差异，并确定了某些miRNA分子在胰腺癌中的靶基因和 具体作用。 目标：构建重组MiR-181a载体，表达miR-181a，并进一步研究MiR一181a对胰 腺癌细胞的生长、凋亡、迁移作用的影响及其对癌基因K-RAS的作用。 方法：l、以pcDNA4．0为载体骨架，用限制性内切酶和PCR方法构建 pcDNA4．O-EGFP载体和pcDNA4．O-EGFP-MiR一181a载体，作为标记空载体和表达 MiR-181a载体。 2、转染胰腺癌细胞系panc一1和mia paca一2，检测处理组和非处理组生长、凋 亡、迁移情况和K-RAS蛋白的表达。 结果：1、转染重组MiR-181a载体后可降低panc一1细胞系中K-RAS蛋白表达； 2、转染重组MiR-181a载体减缓panc一1和mia paca一2细胞生长； 3、转染重组MiR一181a载体增加panc—l和mia paca一2细胞凋亡； 4、转染重组MiR一181a载体降低panc一1和mia paca-2细胞迁移能力； 结论：重组MiR一181a载体对胰腺癌细胞系有生长抑制、增加凋亡、减少迁移 的作用，并降低癌基因K—RAS蛋白的表达。 关键词：miRNA胰腺癌K—RAS 4 英文摘要Construction 英文摘要 Construction of recombinant MiR一18la vector and its inhibition in pancreatic cancer cells Abstract BACKGROUND：Pancreatic cancer is a lethal disease with poor survival and high mortality,and up to now no effective therapeutic approaches have been found in blame of hardly early diagnosis，early metastasis，and resistance to chemotherapy and radiation． Accurate early diagnosis and new therapeutic modalities are therefore urgently needed． MicroRNAs(miRNAs)are small noncoding IⅢAs form 1 9 to 25 nucleotides，which negatively regulate post—transcriptional gene expression．Disturbance of microRNA expression may play a role in the metabolism，proliferation，differentiation，apoptosis of cells．K-RAS is an oncogene expressed nearly 1 00％in pancreatic ductal adenocarcinoma．It is the target gene of some accurancy miRNAs such as let一7 in lung cancers．MicroRNA expression patterns have been made to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis．And the target gene of certain aberrantly expressed miRNAs and the role of certain miRNAs in pancreatic CanCer cell has been identified． Objective： Construct the recombinant MiR—l 8