分子荧光与磷光光谱分析法解读.ppt

卤素离子对于奎宁的荧光有显著的熄灭 作用，但对某些物质的荧光并不发生熄灭作 用，这表明熄灭剂和荧光物质分子之间的相 互是有选择性的。 荧光熄灭作用在荧光分析中有着降低待 测物质的荧光强度的不良作用，但另一方面， 我们可以利用某一物质对某一荧光物质的熄 灭作用建立对该物质的荧光熄灭法检测。该 法常具有更高的选择性。 1. 碰撞熄灭 溶液中荧光物质分子 M 和熄灭剂 Q 相碰撞 而引起荧光熄灭。 比较速率 (1)M ＋ h υ →M * ( 吸光 ) 1 (2)M * → M ＋ h υ ( 发生荧光 ) k 1 [ M * ] (3)M * +Q M+Q+ 热 k 2 [ M * ][Q] ?? ? 1 k ?? ? 2 k Stern-Volmer 方程式 k ：熄灭常数 [Q] ：熄灭剂浓度 (M) F 0 ,F 分别是熄灭剂 Q 不存在时及存在时的 溶液的荧光强度 ) ( 10 7 2 3 21 R D R D PR k t t ? ? ? ] [ 1 0 Q k F F ? ? 2. 组成化合物的熄灭 某些荧光物质溶液在加入一些熄灭剂之 后，溶液的荧光强度显著降低 ; 随着温度的升 高，荧光强度而增强。 上述情况可能是由于一部分荧光物质分子 M 与熄灭剂分子 Q 作用而生成了络合物 MQ ，如 络合物 MQ 的形成是由于微弱的范德华引力的 作用，则所形成的络合物并不发生荧光，且 对 solu 的吸收并不发生任何影响。 能量降低 ? ? ? h M M M h M h MQ MQ Q M 1 k * * ? ?? ? ? ? ? ? ? ? 发生荧光的物质仍为 M* 分子，品种并没有改 变，所以荧光分子的平均寿命也没有改变，至于 solu 温度升高荧光强度之所以增强，可能是由于 温度升高时该络合物较不稳定，较多地分解为 M 和 Q 分子的缘故。这一点可以作为这一类型熄灭 不同于碰撞熄灭的标志。 如果络合物 MQ 的形成是由于强大的力，则络 合物 MQ 将具有它自己的吸光特性，溶液的吸收光 谱也将发生改变。 3. 转入三重线级的熄灭 E C 位 E 能 π * G D π A B CBD 处于单线态的基态 EGF 为第一激发单线态 虚线为激发三线态 当由单线态转移至三线态时，多余的振动 能在碰撞中损失掉， solu 中绝大多数转入三重 线级的分子在一般温度下是不会发光的，它 们把多余的能量消耗于它们与其它分子的碰 撞之中，因而引起荧光的熄灭 。 转入三重态的分子在低温下可由三线态 重新返回到基态，在这一过程中将放出波长 较长的磷光。 含溴、碘化合物、重氮、羰基、羧 基及某些杂环化合物 容易转变至三线态， 因而易使荧光熄灭。电子自旋方向的改变 系有 强烈磁场的诱导作用 所引起的，在原 子核附近，尤其是在 Br 或 I 这样重的原子 核附近，存在着强烈的磁场，所以含溴、 碘的化合物容易使溶液荧光熄灭。 几乎所有会发生荧光的有机化合物都会 被溶解在溶液中的氧分子熄灭剂熄灭到不同 的程度。 三线态的氧