植物组培快繁过程中的问题解决措施.pptVIP

第一组 一、污染及预防措施 （一）．病原 污染是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的侵染，在培养容器中滋生大量的菌斑，是培养材料不能正常生长发育的现象。按病原不同，可将污染分为细菌污染和真菌污染。 污染的原因 在组织培养中污染经常发生，其原因也是多种多样，可归结为两 个方而:一是接种前和操作过程的污染;二是接种后的污染。 接种前的污染 接种前的污染一是接种室环境杂菌含量过高.二是接种时各器具 灭菌时间短，操作没有严格按照要求进行.另外，接种人员自身消毒不 严。此类污染可通过完善操作、培养环境，严格操作程序来克服。 接种后的污染 接种后真菌大而积污染可能原因： 一、是接种室的抱子过多或超净台的滤布不洁。 二、是外植体消毒处理不完全。对外植体带菌引起的污染，情况比较复杂，与外植体的种类、取材季节、部位、预处理方法及消毒方法等密切相关。 三、是继代、生根培养等阶段培养物的转接操作比 较粗糙，将微生物带入培养瓶内，引起新的污染.操作人员无菌意识不强、无菌操作技术不熟练也是一个重要因素。 防止污染的措施 针对以上原因，对整个组织培养工作进行改进，采取了如下一些措施。 1、经常对接种室进行空间消毒 2、 外植体材料的选择和灭菌 要想取得理想的无菌材料，除精选材料外，要求操作人员严格按照无菌操作顺序操作。 褐变是组织培养中常遇到的问题，外植体在培养过程中，自身组织从表而向培养基释放褐色物质，使培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步褐变而死亡的现象。 褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物多少和多酚氧化酶活性有关。 1、植物材料木木植物，单宁含量或色素含量高的植物容易发生褐变。因为酚类的糖昔化合物是木质素、单宁或色素合成前体.酚类化合物含量高，木质素单宁或色素形成就多，而酚类化合物含量高将导致褐变的发生，因此，木木植物一般比草本植物容易发生褐变。 幼龄材料一般比成龄材料褐变轻，可能与幼龄材料中酚类化合物含量少有关。 2、取材部位及时期用油棕幼嫩器官或组织，如胚等外植体进行培养.褐变较轻，而用高度分化的叶片作外植体.接种后则很容易褐变。对濒危植物翅果油树的组织褐变研究也表明幼龄的茎段是诱导愈伤组织的最佳材料。 植物体内酚类化合物含量和FPO活性呈季节性变化.植物在生长季节都含有较多的酚类化合物。FPo活性和酶类含量基木是对应的，春秋季较弱，随着生长季节的到来，酶活 性逐渐增强。所以一般都选在早春和秋季取材 3.1无机盐。 在初代培养时，降低盐浓度可以减少酚类物质外溢.从而减轻褐变。如将DKW培养基的无机盐浓度减少1/ 21101，核桃外植体的褐变率就由55.8%降至32.5% 0无机盐中有些离子.如M12+ .C罕 +是参与酚类合成与氧化酶类的组成成分或辅因子，因此盐浓度过高会增加这些酶的活性.酶进一步促进酚类合成与氧化 3.2植物生长调节剂。 3.3抗氧化剂 3.4吸附剂 3.5培养基状态 4其他因素 4.1外植体的大小及伤害 4.2光照 4.3温度 4.4化学消毒剂 1、选择适当的外植体 2、添加褐变抑制剂和吸附剂 3、对外植体进行预处理 4、筛选合适的培养基和培养条件 5、连续转移 玻璃化现象是指在培养过程中材料呈半透明状，组织结构发育畸形的现象，又称过度水化.玻璃化的苗由于组织畸形，分化能力降低，不易成活。因此不宜用作继代和移栽的材料。 玻璃化的原因 迄今为止，对于玻璃化的成因尚无定论，目前认为玻璃苗的形成可能有以下几方而的原因。 1培养条件的影响 试管苗培养过程中，光照、温度、湿度.pH值均间接影响着玻璃化的发生91培养时光照远较自然环境下弱，一般仅为1000^3000)x,培养器皿内相对湿度过高，氧气供应逐日下降，Cot浓度逐渐上升，培养基中各化学成分往往开始浓度过高而后又供应不足.肖玉兰等5o:究发现，光照度在100 00-20000lx范围内，随着光照度提高，玻璃化苗显著减少.降低培养温度、相对湿度，提高pH值也可有效防止玻璃苗发生。 2培养材料的影响。 培养的植物种类、外植体类型及大小显著影响着玻璃苗的发生。外植体越幼小，玻璃苗发生机率越大，这可能是外植体的较老组织中含有防止玻璃苗产生的物质，或者是较大外植体的分生组织远离培养基表而，而使其生长环境的水分状况得到改善.周菊花ail发现瑞香外植体取材部位显著影响玻璃苗发生频率，对枝条而言.取芽和茎基之间的中段茎作外植体易发生玻璃化现象。 3培养基成分的影响 许多研究表明，琼脂的成分变化对玻璃苗的形成有重要影响.戴挂林等发现，由于琼脂中Ca