FISH技术在血液肿瘤中的应用精品课件.pptVIP

以p53探针模式图为例，17号染色体1区3带1亚带包含p53的区域标记了一段含绿色荧光的260kb DNA序列；D13S319指13号染色体上独一无二的编号319的DNA片段，标记了一段含红色荧光的220kb DNA序列。正常情况下显示2R2G信号，发生D13S319位点缺失时显示1R2G。 IGH的探针在基因的两端分别标记了红色和绿色荧光，正常情况下显示红色绿色重叠信号或黄色信号，当IGH发生易位时显示为红色和绿色的分离荧光信号。 P53/D13S319探针 （双色探针：D13S319红/ P53绿） D13S319 P53 正常 异常 IGH探针（双色分离探针） 14 16 14 16 临床意义 判断生存期 预后较差：P53缺失（24.7个月） 1q21 扩增（21.9个月） IGH发生t(4;14)，t(14;16)易位（24.7个月） 预后中等（42.3个月）：RB1缺失 D13S319缺失 预后较好（50.5个月）：IGH发生t(11；14)易位或者其他遗传改变 指导临床用药（个体化治疗）：MM的初治治疗多选用化疗，包括MP方案（马法兰、泼尼松）、VAD方案（长春新碱、多柔比星、地塞米松）等；对于难治和复发的多发性骨髓瘤，多采用联合化疗和沙利度胺进行治疗；干扰素主要用于维持治疗，对上述治疗方法无效者可进行造血干细胞移植。对于预后好的患者，使用α干扰素、环磷酰胺或联合化疗没有明显的区别；对于预后中等的患者，使用α干扰素治疗反而会缩短患者总生存期。可见，多发性骨髓瘤基因异常的检测对临床有效开展个性化治疗提供了重要依据。 白血病FISH检测 1、 慢性淋巴细胞白血病（CLL）检测 检测位点： P53、RB1、D13S25、ATM基因以及12号染色体。 推荐样本：外周血 临床意义： 判断生存期：预后差，P53缺失（32个月） 预后较差， ATM缺失（79个月） 预后中等， CSP 12三体（114个月） 预后较好，RB1缺失、 D13S25缺失（133个月） 指导临床用药（个体化治疗） 7-11%CLL伴有P53缺失，预后不良，漂吟类似物治疗无效，应选用不涉及p53信号传导系统的药物； ATM位于染色体11q22-23，11q22.3缺失是CLL另外一个预后较差的核型异常，发生率12-20%，ATM缺失与CLL进展密切相关； +12是最早发现的B-CLL常见染色体异常，发生率15-35%，常伴有其他核型异常； 13q缺失是CLL最常见的染色体异常，40-60%的CLL出现该异常。RB1和D13S25位于此位点，单纯del(13q14)预后较好，若伴有+12、11q-等其他染色体异常，则预后通常较差。 2、 慢性粒细胞白血病（CML）检测 检测位点： BCR/ABL融合基因、ASS基因。 推荐样本：骨髓 适用人群：CML初诊及治疗监测的患者 慢性粒细胞性白血病是一种发生在早期多能造血干细胞上的恶性骨髓增生性疾病（获得性造血干细胞恶性克隆性疾病）。 对CML的检测主要针对BCR/ABL融合基因，这种融合基因是通过（9；22）号染色体的基因重排及易位而形成的。 BCR/ABL融合基因检测 BCR/ABL融合基因通过t(9;22)号染色体易位而形成。9号染色体上原癌基因(ABL)的断裂点比较恒定，22号上断裂点簇集区(BCR)的断裂点不恒定。 BCR-ABL-210见于95％的CML(主要断裂点断裂形成)，BCR-ABL-190见于17%-30%的成人急性淋巴细胞白血病和2%-6%的儿童急性淋巴细胞白血病(次要断裂点断裂形成)，但从染色体组型与慢性粒细胞白血病的费城染色体在形态上看不出区别，FISH检测BCR/ABL融合基因可以区分。 检测探针： 额外信号探针（ES ）：可区分BCR/ABL融合基因形成于主要断裂点（M-BCR位点）或次要断裂点（m-BCR位点） 。 双色双融合探针（DF） ：只可检测是否有BCR/ABL融合基因，不能区分主次断裂点。 1. ES探针 可区分BCR/ABL融合基因形成于主要断裂点或次要断裂点，用于初诊和指导格列卫用药。异常结果显示为两红、一绿、一黄荧光信号。 在典型的阳性细胞中，如果有BCR/ABL融合基因且BCR断裂位点为M-BCR，其信号类型体现为2R1G1F；断裂位点为m-BCR，其信号类型体现