超滤法分离浮萍多糖工艺.PDFVIP

2006年4月 重庆大学学报(自然科学版) Apr．2006 第29卷第4期 Journal of Chongqing University(Natural Science Edition) Vol_29 No．4 文章编号：1000—582X(2006)04—0069—04 超滤法分离浮萍多糖的工艺 周 菁，王伯初，王 阳，李知敏 (重庆大学生物工程学院教育部生物力学及组织工程重点实验室，重庆 4Ooo3O) 摘 要：探索超滤法分离浮萍中免疫活性成分浮萍多糖的工艺．通过煎煮、超滤、脱蛋白、乙醇沉淀 等步骤对浮萍多糖进行提取分离，硫酸一苯酚法和硫酸一蒽酮法测定提取液和样品中的总糖含量，考马 斯亮蓝G250比色法测定其蛋白质含量．得到浅褐色粉末，纯度53．5％，蛋白质含量1．2％，收率 6．43％．该方法可以简单、快速、有效地对浮萍多糖进行分离． 关键词：浮萍；多糖；分离；超滤 中图分类号：Q539 文献标识码：A 浮萍(Herba Spirodelae SeU Lemnae)为浮萍科植物 平科学仪器有限公司；756MC紫外可见分光光度计， 紫背浮萍或青萍的全草，在我国各地分布广泛、资源丰 上海精密科学仪器有限公司；UEOS503型中空纤维膜 富．化学成分研究表明，浮萍含有多种黄酮类化合物及 组件，天津膜天膜工程技术有限公司；Sorvall RC一28S 多糖、蛋白质、粘液质、类脂、鞣质、树脂等物质．浮萍多 型超速冷冻离心机，美国OU PONT公司；BT01—100／ 糖是其中重要的生物活性物质，据报道，浮萍多糖具有 YZ1515型蠕动泵，兰格恒流泵有限公司；Flexi—DryTM 增强单核一巨噬细胞系统吞噬功能的免疫调节活 MP冷冻干燥机，美国Frs SYSTEMS公司． 性…．经初步药效学试验，笔者发现浮萍多糖能明显 1．2分析方法 改善环磷酰胺致免疫力低下KM小鼠腹腔巨噬细胞吞 总糖测定，采用硫酸一苯酚法 ]和硫酸一蒽酮 噬鸡红细胞的功能，并显著提高健康KM小鼠的碳粒 法 ；蛋白质测定，采用考马斯亮蓝 G250比 廓清能力． 浮萍多糖糖链的主要成分包括D一半乳糖醛酸 色法 一 ． (64％)、D一芹菜糖(25％)、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李 1．3 实验方法 糖和吡喃木糖 】，其结构尚未完全探明，浮萍多糖的 1．3．1 浮萍多糖粗提液的制备 分离、纯化方法也未成型．传统的植物多糖分离方法周 取300 g浮萍全草，粉碎，按1：20料液比加水，以 期长、成本高、操作复杂．超滤是20世纪60年代新兴 10％NaOH溶液调pH9，煎煮约6 h，12层脱脂纱布过 的一项膜分离技术，在中药产业中具有其独特的作用 滤，滤液静置过夜后8 000 r／min离心10 rain取上清， 和较大的开发潜力．笔者以应用超滤系统为主分离浮 即得浮萍多糖粗提液． 萍多糖并辅以脱蛋白、乙醇沉淀等方法以建立一种稳 1．3．2 超滤及其预处理 定、快速的浮萍多糖提取分离工艺． 粗提液在超滤前需预处理进一步去除杂质以降低 1材料与方法 膜的污染．实验采用0．45 m膜微滤除去粗提液中的 圆形物 ．将经过预处理的提取液在西50 in／n×