医学微生物学：病毒感染的检测方法与防治原则.pptx

病毒感染的检查方法与防治原则; 0;病毒感染检测：;标本采集与运送 ;标本的采集 标本种类的选择 根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。 ;常见分离病毒标本的选择 ;常见标本的采集方法 血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100n／ml肝素钠。用于分离CMV、HSV、黄病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠 道病毒。 脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴立即送检。在4℃可存放72h。用于分离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。 宫颈或阴道拭子：采取病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm停留5秒取出，冰浴立即送检。用于分离 HSV、CMV。 粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液立即送检，用于分离腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。;常见标本的采集方法 含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分离流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。 喉拭子：用压舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分离腺病毒、CMV、肠道病毒、HSV、流感病毒等。 尿道拭子及尿液标本：尿道拭子伸入尿道4cm转动3次，以获得较多的上皮细胞，用于分离CMV和HSV。 尸检标本：死亡后尽早采集各种器官，分别使用器械和容器。;标本的运送和保存 病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，4℃下数ｈ或-70℃。 冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。 病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml，为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。 ;病毒感染检测（标本采集）：;病毒培养;常用于病毒分离的细胞 ;鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位，最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。 动物接种 动物对病毒的敏感性是不同的，选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。;细胞培养的结果观察 细胞病变效应(CPE) ：细胞肿大，变???堆积成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等； 不出现细胞病变现象。（红细胞吸附） 细胞培养液pH的变化。 ;;CPE: Measles (风疹病毒) on human lung carcinoma (A549);CPE: vaccinia(痘病毒);RSV (呼吸道合胞病毒)- syncytia;CPE: inclusion bodies;红细胞吸附抑制试验 正粘病毒，副粘病毒感染的宿主细胞，病毒增殖后产生细胞病变，但在细胞表面含有病毒某些抗原成分(血凝素)，能吸附鸡、豚鼠或猴红细胞。 可作为初步鉴定。如果在培养瓶中加入相应的血凝素抗血清后，不出现红细胞吸附现象，是为红细胞吸附抑制试验阳性，可作为病毒鉴定的依据。;红细胞吸附;Hemadsorption of erythrocytes to cells infected with influenza viruses, mumps virus, parainfluenza viruses, or togaviruses. These viruses express a hemagglutinin on their surfaces, which bind erythrocytes of selected animal species. (From Medical Microbiology, 5th ed., Murray, Rosenthal & Pfaller, Mosby Inc., 2005, Fig. 51-5.);;Plaque;Plaque formation;;Plaque assay;免疫荧光;细胞蛋白表达检测;5/14/2021;;Endpoint titration;病毒中和实验 (特异性抗体检测);5/14/2021;;Titer = 32 HA units/ml;Hemagglutination assay. Seven different samples of influenza virus, numbered 1 through 7 at the left, were serially diluted as indicated at the top, mixed with chicken red blood cells (RBC), and incubated on ice for 1 to 2 hours. Wells in the bottom