血管生成素-1在体外对人胃癌细胞生物学作用的研究.pdfVIP

血管生成素 -1 在体外对人胃癌细胞生物学作用的研 究 【摘要】 目的：探讨人血管生成素 -1(Ang1) 及其与血管内皮生长因子 165(VEGF165）共同作用对人胃癌细胞的生物学作用 , 研究其在肿瘤发生中的作 用机制。方法：应用复制缺陷型腺病毒（ Ad）- 绿色荧光蛋白（ GFP）、Ad- Ang1、Ad-VEGF165和 Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2转染人胃癌细胞株 MGC-803，使用 MTT比色法分析它们对胃癌细胞增殖的影响；通过流式细胞仪分析血浆饥饿时 其对凋亡的影响；使用免疫细胞化学法检测 Ki-67 的表达；应用 RT-PCR方法半 定量检测 bcl-2 mRNA、bax mRNA的表达情况。结果： MTT结果显示 24、48 和 72 h Ad-Ang1 转染组、 Ad-VEGF165转染组和 Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2转染组吸 光度均明显高于 Ad-GFP组及对照组 (P0.05) ；Ad-GFP组与对照组相比无显着差 异 (P0.05) ；Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2转染组吸光度明显高于 Ad-Ang1 转染组和 Ad-VEGF165转染组 (P0.05) 。流式细胞仪检测结果显示 Ad-Ang1、Ad-VEGF165 及 Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2处理组与对照组及空转染组相比均能够显着抑制细胞 凋亡 (P0.01) 。免疫细胞化学法显示各转染组 Ki-67 表达强度均显着高于对照组 和 Ad-GFP组 (P0.01) 。RT-PCR结果显示 bcl-2 mRNA 在各转染组中的表达要明 显高于对照组 (P0.05) ；bax mRNA在各转染组中的表达要明显低于对照组 (P0.05) 。结论： Ang1、VEGF165和 Ang1+VEGF165/2能够明显促进人胃癌细胞 MGC-803增殖，抑制血浆饥饿时的凋亡， Ang1+VEGF165/2组的作用要显着强于 Ang1 组和 VEGF165组。 【关键词】 血管生成素 -1 ； 血管内皮生长因子 165； Ki-67 ； 胃癌； 增 殖； 凋亡 血管生成素 1 （angiopoietin-1,Ang1 ）被发现在肿瘤的转移、血管生成 和肿瘤的侵袭中发挥重要作用，目前研究较多集中于其对肿瘤血管生成的作用 上。 Ang1 是否能够对肿瘤细胞产生作用，以及 Ang1 和血管内皮生长因子 165 （VEGF165）是否能够协同作用于肿瘤细胞，目前并无相关研究。本实验以腺病 毒为载体，将 Ang1、VEGF165转染至人胃癌细胞株 MGC-803，研究其对胃癌细 胞株体外增殖和凋亡的影响。 1 材料和方法 1.1 材料 人胃腺癌细胞株 MGC-803购自中国科学院，复制缺陷型腺病毒（ Ad）重组 体 Ad-Ang1、Ad-VEGF165及对照病毒 Ad- 绿色荧光蛋白（ GFP）由南京医科大学 第一附属医院构建并赠送， Annexin Ⅴ-FITC/PI 试剂盒购自 Bender Medsystems公司。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养 MGC-803细胞用含有 10％胎牛血清的 1640 培养液于 37 ℃、 5%CO2的培养箱中培养，培养基中含 100 U·ml-1 青霉素和链霉素。 1.2.2 MTT 法测定 Ad-Ang1、Ad-VEGF165以及 Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2 对 MGC-803细胞增殖的影响 实验分对照组 ( 正常细胞组 ) 、Ad-GFP组 ( 平行对 照组 ) 、Ad-Ang1 组(Ang1 转染组 ) 、A