外源化学物致突变作用.pptVIP

例如： MGMT在肝脏的活性为0.34～1.09pmol 脑的活性为0.07～0.1pmol 一些肿瘤组织中检测不到 一些对烷化剂敏感的瘤株活性降低或全无活性 说明MGMT缺乏与肿瘤发生有一定关系 MGMT的多态性可解释某些个体对烷化剂作用特别敏感 学习文档 PARP家族由PARP-1和其它新鉴定出的PARP酶组成 DNA断裂修复酶，可能是氧化损伤的一种重要修复形式 通过其催化的反应产生多种生物学效应，如诱导细胞辅酶Ⅰ消耗；抗重组和基因稳定的作用；核酶修饰作用；组蛋白结合及对染色体构型的影响；参与细胞凋亡等 对于PARP的研究具有重要的毒理学意义 2．聚(二磷酸腺苷-核糖)多聚酶(PARP) 学习文档 第五节 观察化学毒物致突变作用的基本方法 学习文档 一、观察项目的选择 1．观察的效应终点类型 基因突变和染色体畸变的检测可直接反映化学毒物的致突变性，是评价化学毒物致突变性唯一可靠的方法 许多试验所观察到的现象并不反映基因突变、染色体畸变和染色体分离异常，而仅反映致突变过程中发生的其他事件 因此，将试验观察到的现象所反映的各种事件统称为遗传学终点(genetic endpoint)。 学习文档 反应遗传学终点的致突变试验有4种： 1979年，国际环境致突变物致癌物防护委员会(ICPEMC)将遗传学终点分为四类： ①基因突变 ②染色体畸变 ③染色体组畸变 ④DNA原始损伤 （一）观察的效应终点类型 学习文档 1983年遗传学终点分为5类： ①DNA完整性的改变(形成加合物，断裂，交联)； ②DNA重排或交换； ③DNA碱基序列改变； ④染色体完整性改变； ⑤染色体分离改变。 其中③实际上指基因突变，④指染色体畸变。 学习文档 化学物是否具有致突变作用，仅用一种试验方法得到的结果是不能肯定的，因此对于化学物的致突变试验要用多种实验配套 有人提出配套试验应包括体细胞和生殖细胞；体内试验和体外试验，包括原核生物和真核生物等 按照ICPEMC的观点就是配套应当包括反映5 种遗传学终点 为此，选择4 种试验即可满足要求；如Ames试验、微核试验、枯草杆菌DNA修复试验和SCE试验。 而生殖细胞致突变在遗传危害评价时，才会考虑 学习文档 （二）遗传毒理学试验的应用目的 在外源化学物的毒理学评价中遗传毒理学试验的目的是： 1、致突变性的鉴定 2、预测潜在的致癌物 3、各种遗传毒物的检测及评价 学习文档 （三）成套的观察项目 遗传毒理学评价程序通常为一组体内、外遗传毒理学试验。因为： ①化学毒物的种类和结构多种多样，其致突变的机制不尽相同，作用的靶细胞也不一样，有的是体细胞，或生殖细胞，或两者兼而有之，故在成套观察项目中既要用体细胞检测又要用生殖细胞；除了从分子水平还要从细胞水平来检测化学毒物的遗传毒性。 学习文档 ②致突变物中仅少数具有直接致突变作用，大多数为间接致突变作用，即需要在体内代谢活化后，才具有致突变作用。体内试验具有完整的活化系统，而体外试验则通过加入模拟代谢系统，如S9来弥补缺乏活化系统的不足。这是体内与体外试验的主要差别。 ③化学毒物的致突变性有强，也有弱；有的在某一检测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱的致突变物。对于弱致突变物在某些系统中比较容易漏检，即出现假阴性。 学习文档 观察项目的选择 1983年国际环境致突变物防护委员会（ICPEMC）提出的致突变试验遗传学终点 学习文档 关于遗传毒理学成套观察项目中那些试验可入选的原则有： ①选择的遗传毒性试验应包括5种类型的遗传学终点。 ②通常的实验材料有病毒、细菌、真菌、培养的哺乳细胞、植物、昆虫及哺乳动物等。 ③体内试验与体外试验配合。 ④应包括生殖细胞和体细胞。 通常，对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对有阳性结果的遗传学终点验证其在体内的真实性，再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 学习文档 二、常用致突变试验 学习文档 基因突变试验： 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验 ） 、哺乳动物细胞基因突变试验 染色体畸变试验： 染色体分析 、微核试验 DNA损伤试验 ： 姐妹染色单体交换(SCE)试验 、程序外DNA合成试验 化学致突变物的检测 学习文档 (一)细菌回复突变试验(Ames试验) 鼠伤寒沙门氏菌原养型(his+) 组氨酸营养缺陷型突变株。(his- ) 正向突变 回复突变 代谢活化系统 受试物 学习文档 Ames试验 检测受试物诱发