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GB4789.4-2016沙门氏菌检验方法学验证报告
验证目的
验证《食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2016》沙门氏菌检验在本实验室的适用性。
二、验证方法
样品采样方案依据GB4789.1-2010《食品微生物学检验 总则》的要求进行,本实验取三个不同的典型样品进行实验,严格按照GB4789.4-2016进行。
表1:实验方法设计表
样品种类
样品名称
样品编号
实验人员
实验方法
蜜饯制品
xxx
xxx
a、b
双人双平行
熟肉制品
xxx
xxx
a、b
双人双平行
坚果制品
xxx
xxx
a、b
双人双平行
除上述实验程序外,为保证本次验证的科学性和准确性,本次实验添加阳性对照组,对照组由标准菌株伤寒沙门氏菌(CMCC(B)50071)接种培养而成,与样品实验程序同时进行。
三、验证设备和试剂
冰箱: SC-322 青岛海尔电器
生化培养箱:SPX-150B-Z 上海博迅实业
电位pH计:PHS-3C+(精确度0.01) 成都世纪方舟科技有限公司
恒温振荡器:SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂
菌落计数仪:Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司
天平:JE-502 上海浦春计量仪器有限公司
培养基和试剂:
缓冲蛋白胨水( BPW ) 北京陆桥技术股份有限公司
四硫磺酸钠煌绿( TTB )增菌液 北京陆桥技术股份有限公司
亚硒酸盐胱氨酸( SC )增菌液 北京陆桥技术股份有限公司
亚硫酸铋( BS )琼脂 北京陆桥技术股份有限公司
沙门氏菌属显色培养基 北京陆桥技术股份有限公司
三糖铁( TSI )琼脂 北京陆桥技术股份有限公司
生化鉴定试剂盒 北京陆桥技术股份有限公司
沙门氏菌 O、H 和 Vi 诊断血清 宁波天润生物药业有限公司
四、验证环境
依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录;
依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜进行清洁消毒灭菌并记录;
依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室及生物安全柜进行沉降菌检测并记录;
无菌室检验:详见《XXX》;
五、验证步骤
1操作步骤
1.1预增菌
无菌操作称取 25g ( mL )样品,置于盛有 225mLBPW 的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需调整pH
,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。使用均质袋直接进行培养,于 36℃±1℃培养 8h~18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃ 不超过18h解冻。
1.2增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取 1mL,转种于10mLTTB内,于42℃±1℃培养18h~24h 。同时另取1mL转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h~24h 。
1.3分离
分别用直径3mm的接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个沙门氏菌属显色培养基平板,于36℃±1℃ 分别培养40h~48h (BS琼脂平板)或 18h~24h(沙门氏菌属显色培养基平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表2:
表2:沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征
选择性琼脂平板
沙门氏菌
BS琼脂
菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变
HE琼脂
蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色
XLD 琼脂
菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心
沙门氏菌属显色培养基
按照显色培养基的说明进行判定
1.4生化试验
1.4.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36℃±1℃培养18h~
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