大鼠耳蜗大上皮嵴的分离和鉴定.pdfVIP

中国人民解放军军医进修学院 硕士学位论文 大鼠耳蜗大上皮嵴的分离和鉴定 姓名：宋巍 申请学位级别：硕士 专业：耳鼻咽喉科学 指导教师：翟所强 ·本课题是在下列研究基佥资助下完成： 国家自然科学基金海外音年学者合作研究基金资助项目(No 国家自然科学基金资助项目(No 36) 北京市自然科学基金资助项目(No：70220 军医进修学院 研究生学位论文原创性声明 秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文 是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文 中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体己经发表 或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用 过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 犀意 日期：崩寸辜；舟，。目 指导教师签名： 秭日期： 军医进修学院 研究生学位论文版权使用授权书 本人保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进 修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原 件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供 被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。 论文作者签名：伟彳珏 日期：埘每‘对，。日 指导教师签名：徽致日期： 军医进修学院硕士学位沦文 英文缩略语表 军医进修学院硕士学位论文 中文摘要 普遍认为噪音，耳毒性药物，老化以及各种疾病引起的毛细胞的缺失， 变性，损伤是感音神经性聋的主要原因。但是毛细胞是位于内耳感觉上皮的 终末分化细胞，以往的研究表明哺乳类耳蜗毛细胞损伤后是不能再生的。长 期以来人们为了探讨毛细胞发育、分化、再生的机制而进行了不懈的努力， 刺激毛细胞的再生从而修复受损的听力及平衡障碍一直是研究的主要方向。 再生可能是重复正常发育中的毛细胞分化的过程。因此，理解毛细胞的 分化有助于毛细胞再生的研究。哺乳类前庭毛细胞的发生也以与低等脊椎动 物相似的方式源自感觉上皮内的前体细胞和支持细胞，但哺乳类耳蜗毛细胞 的确切起源还不清楚，组织学研究表明内、外毛细胞在胚胎发育过程中可能 分别起源于大、小上皮嵴。 最近，大上皮嵴(greaterepithelialridge，GER)成为哺乳动物毛细胞再生 研究的一个新热点。研究表明，大上皮嵴很可能是毛细胞的前体细胞群之一。 毛细胞分化的正性调控基因Mathl在体外培养的大鼠耳蜗中过度表达后，能 诱导大上皮嵴形成大量新生毛细胞。一些参与毛细胞分化和再生的重要基因 达，这些研究结果都表明大上皮嵴在毛细胞的分化和再生过程中起着重要的 作用，是重要的细胞群，有可能是耳蜗毛细胞的前体细胞池之一。目前对大 上皮嵴了解的不多，本课题的目的在于探讨利用酶消化和机械解剖相结合的 方法分离出有活性的大上皮嵴。通过形态学比较，免疫组织化学染色，RT-PCR 对所分离的大上皮嵴进行鉴定，原代培养以验证分离的大上皮嵴活性。 一、大鼠耳蜗大上皮嵴的分离 选取出生后0天的SD大鼠耳蜗，取出基底膜，将其放入含有嗜热菌蛋 白酶和少许DNA酶的D-Hank’s溶液中，37 4C孵箱孵育25分钟进行酶消化， 然后在高倍显微镜下进行机械分离。经过酶的作用后，耳蜗上皮