分子荧光分析法.ppt

分子荧光分析法; 第一节 基本原理;精品资料; 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”;基态：电子自旋配对， 多重度=2s+1=1，为单 重态，以S0表示。;S0;注: 去活化过程（Deactivation） 处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射跃迁等去活化过程返回至基态 。这些过程包括： 1）振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 在液相或压力足够高的气相中，处于激发态的分子因碰撞将能量以热的形式传递给周围的分子，从而从高振动能层失活至低振动能层的过程，称为振动弛豫。 2）内转换（Internal Conversion，IC） 对于具有相同多重度的分子，若较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时，则电子可在重叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁，如S2-S1；T2-T1。 ;3）外转换（External Conversion，EC） 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程，也称“熄灭”或“猝灭”。 4）系间跨跃（Intersystem Conversion，ISC） 系间跨跃是发生在两个不同多重态之间的无辐射跃迁，如从S1到T1，该跃迁是禁阻的。然而，当不同多重态的两个电子能层有较大重叠时，处于这两个能层上的受激电子的自旋方向发生变化，即可通过自旋-轨道耦合而产生无辐射跃迁，该过程称为系间跨跃。 ; 5）荧光发射 分子电子从单重激发态（Kasha规则）的最低振动能级在很短时间（10-9-10-6s）跃迁到基态各振动能层时所产生的光子辐射称为荧光。由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）。 6）磷光发射 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后，再经振动弛豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4-10s内跃迁到基态的各振动能层所产生的辐射。 ;二、荧光的产生： 1.条件：①物质为荧光物质---内??； ②外界能量的提供---外因。 2.荧光产生过程： 荧光物质→接受外界能量（合适能量）→激发跃迁→无辐射跃迁返回第一激发态最低振动能级→辐射跃迁返回基态各振动能级。 3.荧光与外界能量的关系： ①接受合适外界能量产生荧光； ②外界能量消失，荧光消失； ③发射荧光能量≤激发外界能量。;三、荧光物质发射荧光强度与分子结构的关系： 1.衡量指标： 荧光效率（fluorescence efficiency, ?） 定义： ?=发出荧光量子数/吸收激发光量子数 注：① 0≤?≤1； ② ?数值越大发射荧光强度越强； ③同一物质在不同介质条件中?的数值 不同； ④在测试?时，其数值大小与相应荧光 物质的稳定性有关。;2.分子结构与荧光： --影响荧光强度的内部因素 荧光物质发射荧光强度大小与其分子中共轭体系大小、强度有关。 共轭体系越大、越强则发射荧光强度越强。 影响分子共轭体系大小、强度的因素： ①共轭双键； ②分子的刚性平面； ③取代基的共轭效应，电子效应。 ;3.介质条件与荧光： --影响荧光强度的外部因素 介质条件影响荧光物质： ①荧光量子产生效率； ②分子共轭效应。 ;主要影响介质条件： ①温度---温度越低发射荧光强度越强； ②溶剂---溶剂极性增加荧光强度增加，溶剂 纯度越高对荧光强度影响越单纯； ③酸度---溶液的pH值影响荧光物质分子的共 轭体系大小、强度； ④散射光---光致发光时入射光发生散射影响 荧光物质的荧光产生； 两种主要影响荧光强度的散射光： 瑞利散射光和拉曼散射光 ;瑞利散射光（Reyleigh scattering light)： ---入射光与物质分子碰撞时未发生能量交换，仅运动方向改变所产生的散射光。 特征：散射光波长与入射光波长相同。 拉曼散射光（Raman scattering light) ---光子与分子碰撞时在改变运动方向同时部分交换能量（光子与分子间）产生使光子能量改变