核酸类药物的生产.pptxVIP

第五节 核酸类药物的生产内容提要一、核酸类药物的分类二、核酸类药物的生产方法三、DNA和RNA的制备四、肌苷的制备五、核酸类结构改造药物的制备DNARNA碱基： 腺嘌呤 A核苷： 腺苷核苷酸： 腺苷酸 AMP (腺苷一磷酸) ADP (腺苷二磷酸) ATP (腺苷三磷酸)(一) 什么是核酸类药物？具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物。 （二）核酸类药物的分类 核酸类药物的分类自然结构核酸类物质的类似物和聚合物具有天然结构的核酸类物质1、具有天然结构的核酸类物质 ATP、GTP、CTP、UTP、肌苷。ATP：用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及动脉或冠状动脉硬化的治疗或辅助治疗。肌苷：用于急慢性肝炎、肝硬化、白细胞减少、血小板减少等。2、自然结构核酸类物质的类似物和聚合物叠氮胸苷、阿糖腺苷、阿糖胞苷等。治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要药物。二、核酸类药物的生产方法直接提取法1水解法（酶水解、碱水解、酸水解）2化学合成法3酶合成法45微生物发酵法酶水解碱水解用碱水解RNA 可产生2’、3’ -混合核苷酸 2’、3’ -混合核苷酸在医药上有它的特殊用途，对血小板减少，白血球减少症和癌症化疗后升白血球均有较好疗效。（一）DNA的制备促进细胞的活化调节新陈代谢延缓机体衰老DNA的作用维护正常免疫功能利用补救合成途径为人体提供脱氧核苷酸，参与人体核酸代谢，从而具有促进细胞生长、修复受损细胞及改变机体代谢的作用。用于急﹑慢性肝炎白细胞减少症，血小板减少症及再生障碍性贫血等的辅助治疗。产品成份－提供四种脱氧核苷酸，参与人体核酸代谢脱氧核糖鸟嘌呤核苷酸脱氧核糖腺嘌呤核苷酸脱氧核苷酸钠注射液1:1:1:1脱氧核糖胞嘧啶核苷酸脱氧核糖胸腺嘧啶核苷酸DNA的粗提取1、准备材料将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。2、取材称取30 g菜花，去梗取花,切碎。3、研磨将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min 。4、过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率，离心25 min，取上清液放入烧杯中，取上清液。5、加冷酒精将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中，并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液，可见白色的DNA絮状物出现。DNA的鉴定1、配制二苯胺试剂　取0.1 mL B液，滴入到10 mL A液中，混匀。2、鉴定取4 mL DNA提取液放入试管中，加入4 mL 二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。（二）RNA的制备化妆品抗癌、抗病毒RNA的作用农业生产关节炎肝炎、心脏病BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)【性?状】 本品为白色或类白色冻干块状物或粉末，易溶于水。【药理毒理】 本品具有提高机体细胞免疫功能和抑瘤作用。【适?应?症】 适用于胰腺癌、肝癌、胃癌的辅助治疗，对乙型肝炎的辅助治疗有较好的效果。本品亦可用于其他免疫机能低下引起的各种疾病。 BP素(注射用核糖核酸Ⅱ) BP素(注射用核糖核酸Ⅱ) BP素(注射用核糖核酸Ⅱ) 1、制备RNA的材料来源 主要采用酵母、面包酵母等。2、提取法制备RNA（1）稀碱法 用氢氧化钠溶液，使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放出来，再用酸中和至pH 7.0，将pH调至RNA的等电点(pH 2.5)，使RNA沉淀出来。 （2）浓盐法 用高浓度盐溶液(6％～8％)处理，同时加热，改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。3、RNA的提取实例啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。取100g压榨啤酒酵母，加入230mL 0.33mol/L的Na0H溶液，20℃以下缓慢搅拌30min。用6mol/L HCl调至pH 7，搅拌15min，离心得清液255mL。冷至10℃以下6mol/L HCl调pH 2.5，置冷过夜，离心得RNA 1.8g。肌苷的背景知识【质量标准】：收载于《中华人民共和国药典》2005年版二部205页肌苷的背景知识【药理作用】 本品能使处于低能缺氧状态下的细胞继续顺利进行代谢，并参与人体能量代谢与蛋白质的合成。【适应症】 临床用于白细胞或血小板减少症，各种急慢性肝脏疾病、心脏疾病、洋地黄中毒症等疾病。 肌苷的背景知识洋地黄肌苷的背景知识肌苷是由次黄嘌呤与核糖结合而成。次黄嘌呤可由腺嘌呤(A)脱氨形成，是嘌呤衍生物。1、肌苷生产的工艺流程 2、肌苷生产的控制要点控制要点菌种菌种扩大培养精制肌苷发酵提取吸附洗脱2、肌苷生产的控制要点菌种 变异芽孢杆菌 (2) 种子扩大培养流程A、斜面培养30-32℃, 培养48h斜面培养基：葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、牛肉浸膏、琼脂B、摇瓶振荡培养