畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术.pptVIP

哺乳动物胚胎工程Mammal Embryo Engineering ;第一节、胚胎移植（Embryo Transplant）;二、胚胎移植的过程及意义;1、遗传物质来自亲代。 2、营养物质来自受体。 ;四、胚胎移植的生理学基础和原则;(二)胚胎移植的基本原则;2、胚胎发育的期限 ;3、胚胎的质量;五、胚胎移植的技术过程;牛胚胎移植示意图;;(一)供体和受体的选择;(二)供体超数排卵处理和受体母畜的同期发情; （发情9～11天） FSH＋PG法牛超数排卵;PMSG法牛超数排卵;FSH＋PG法羊超数排卵;PMSG法羊超数排卵;PMSG法小鼠超数排卵; 3、受体母畜的同期发情 与供体母畜超排同时进行。 P4、PGF2a ;(三)供体母畜的配种;同期发情与超排程序;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;(四)胚胎的收集;从子宫角顶端冲洗输卵管：牛、羊、兔;从输卵管伞处冲洗 输卵管：猪、马;胚胎在子宫角时; ;非手术法收集胚胎;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;(五)胚胎的检查;第6天收集的胚胎（未拣）;二细胞至四细胞胚胎;2、胚胎鉴定;原核～8细胞;桑椹胚~早期囊胚;异常胚胎示意图;卵裂球脱落;透明带破裂;㈥ 胚胎的移植;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;(七)供体和受体的观察; 六、胚胎移植目前存在的问题和发展前景。;(二)发展前景;第二节 胚胎冷冻与体外受精;(二)冷冻原理;冷冻保护剂：甘油、DMSO、 乙二醇、丙二醇。 ;(三)冷冻及解冻方法; 2、快速冷冻，快速解冻;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;　 3、一步冷冻法 　　　采用25%的甘油、丙二醇、乙二醇中的任何两种保护剂组成高浓度的玻璃化液，分两步移入低、高浓度的保护剂中，装管并在4℃平衡10′然后投入液氮。（DMSO对胚胎的毒性很大） ;25℃→25%甘油13′→ 25%甘油、0.25M蔗糖10′→4℃ 25%甘油、25%丙二醇30″→液氮 解冻：胚胎→25℃水温→0.5mol/L蔗糖5′→保存液冲洗3-4→装枪移植。 ;二、体外受精; 2、未成熟卵子的培养 ⑴TCM-199+胎牛血清+丙酮酸，可加cAMP、血清、生长因子、生殖激素(FSH、17β-雌二醇，hCG) 39℃ 5%CO2饱和湿度20-30h ⑵M199+PMSG10/ml+hCG10/ml 17β-雌二醇1mg/L 10%猪卵泡液 ⑶10%FSC+半胱氨酸69mg/L ;培养成熟牛卵母细胞;(二)精子体外获能;(三)体外受精;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术; ; 卵母细胞质成熟：细胞质成熟较难鉴定，因此，通常只检查细胞核的成熟。 卵母细胞核染色 制片：压片。 固定：固定液 乙醇：乙酸＝3：1，24h 染色：1％地衣红，40％乙酸 镜检：光学显微镜 ;制片、固定、染色示意图 ;(四)早期胚胎的体外发育培养;(五)精子显微注射;胞质内授精（ICSI）;带下授精;第三节 胚胎显微操作;胚胎分割;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;二、细胞核移植;核移植的程序图;克隆技术路线图;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;“多莉”doly;显微注射仪;显微注射仪操作臂;显微注射仪操作臂;显微注射仪操作臂;拉针仪;煅烧仪;磨针仪; 核移植技术的操作过程 ⒈供体核的分离技术 a、胚细胞 　胚胎干细胞　　类胚胎干细胞 b、体细胞 ;⒉受体细胞的去核技术 a、受精卵：松弛素 b、成熟卵母细胞　 ⒊核卵重组技术：移入供体核 ⒋卵母细胞的激活与细胞融合 ⒌核移植胚的培养与移植或 重复克隆技术。 ;三、转基因动物;转基因动物的制备;㈠转基因的意义;转基因动物制备过程;㈡基因导入方法;转基因小鼠制备过程;⒉逆转录病毒感染法 ⒊胚胎干细胞介导法 ⒋精子载体法;畜牧兽医第七章哺乳动物胚胎与配子生物工程技术;第四节性别控制技术;㈣H-Y抗原法 抗H-Y的抗体处理精子，使Y精子失能 ㈤精子的柱层析分离法 葡聚糖凝胶G-50 ; X精子的DNA含量略多干Y精子 ⒈速度慢， ⒉受胎率较低， ⒊价格昂贵。 ;二、胚胎的性别控制;⒈细胞毒性分析法 　 含有H-Y抗血清与补体的培养液中培养，有H-Y