重组DNA技术与基因工程.pptxVIP

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2021-07-14 发布于河北
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重组DNA技术与基因工程.pptx

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重组DNA技术与基因工程1 重组DNA技术与基因工程的基本概念重组DNA技术所需的基本条件2 重组DNA技术的操作过程3 目的基因的克隆与基因文库的构建4 外源基因在大肠杆菌中的表达5 外源基因在酵母中的表达6 3 重组DNA技术的操作过程切接转增检3 重组DNA技术的操作过程A DNA的体外重组（切与接）同种内切酶生产的粘性末端的连接同尾酶生产的粘性末端的连接不同粘性末端的连接人工粘性末端的连接基于同源重组的In-Fusion连接重组率GAATTCGAATTCCTTAAGCTTAAGAATTCG5 5GCTTAA AATTC AATTC5 5 GG555 AATTC5 GGGGCTTAA CTTAA CTTAA 55GAATTCGAATTCGAATTCGAATTCCTTAAGCTTAAGCTTAAGCTTAAG同种内切酶生产的粘性末端的连接5 5EcoRI退火AATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAT4-DNA ligase5 55 5GGATCCGGATCC5 5 CCTAGGCCTAGG55 5 5 TTTGATCATACTAG ACTAG ACTAGTACTAG 5TGATCCTGATCCGGATCAGGATCAACTAGGACTAGGCCTAGTCCTAGT同尾酶生产的粘性末端的连接BclIBamHI5 5 GATCAGATCCG5 GTCCTAG55退火GATCCG GATCAGCCTAGT5GATCCG GATCAGCCTAGT5T4-DNA ligase5 55 5GGATCCGGATCC5 5 CCTAGGCCTAGG55 CCTGCACTGCAGGACGTCGGCGATCCCGATCCGGATCGGGATCGGCTAGGGCTAGGCCTAGCCCTAGC不同粘性末端的连接PstIBamHI5 G3 GATCCG5 G3 ACGTCCCTAG55T4-DNA pol切平Klenow补平 G5 GATCCGGATC5 CCTAGGCCTAG55T4-DNA ligase5 55 5GCTTAA 5GAATTGGGGGGGATCCGAATTGGGGGGGATCCCTTAACCCCCCCTAGGCTTAACCCCCCCTAGG人工粘性末端的连接 5‘突出末端EcoR IBamH I5 5 AATTCGATCCG5 GGCCTAG55Klenow补平Klenow补平GAATT5 5 AATTCGATCCGGATC5 CTTAA 5TTAAGCTAGGCCTAG55TdTdGTPTdTdCTPGAATTGGGGGGAATTCGATCCGGATCCCCCCCCTTAA GGGGGGTTAAGCCCCCCCTAGGCCTAG退火T4-DNA ligaseBamH IBamH I5 GGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG55 GGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG5GCATGCCCCCCTGCAGGCATGCCCCCC GGCATGCCCCCCTGCAGGCATGCCCCCC GCGGGGGGACGTCCGTACGGGGGGACGTCCGGGGGGACGTCCGTACGGGGGGACGTC人工粘性末端的连接 3‘突出末端Sph I5 GCATG 3CGCTGCA 3 Pst IC3 GTACG3 ACGTCG5TdTdCTPTdTdGTPGCATGCCCCCC 3CGCTGCAGGGGGG 3 C3 CCCCCCGTACG3 GGGGGGACGTCG退火5 CTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG55 CTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG5KlenowT4-DNA ligasePst IPst I5 CTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACG55 CTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACG5TTTTGTTTTTTTTTTGGTTTTTTTTTTGTTAAAATTAAGTTGAACAAAAAAAAAACCAAAAAAAAAACCAACTGCACAACAAGTTGAATTACGTAAAATTTTTT人工粘性末端的连接平头末端5 G 3CGC 3 C3 G3 CG5TdTdTTPTdTdATPGTTTTTTTTTT 3CGCAAAAAAAAAA 3 C3 TTTTTTTTTTG3 AAAAAAAAAACG退火T4-DNA ligase5 CAAAAAAAAAACGTTTTTTTTTTG55 CAAAAAAAAAACGTTTTTTTTTTG5加热S1基于同源重组的In-Fusion连接每条引物外侧设计含有与载体相应末端同源的15个碱基序列引物In-Fusion酶引物载体质粒重组质粒