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T细胞培养标准操作规程 This modewas revised by the Standardization Office on December 10, 2020 This mode 百利药业生物药研发部 标准操作规程 题目:293T细胞传代培养操作规程 编号：S0P-M-e-003- 制定者：（签名）日期：年月日 批准者：（签名）日期：年月日 生效日期：年月日 修改和追加记录 序号 日期 内容摘要 签名 1 2 3 I 5 6 目：293T细胞培养操作规程 1目的293T细胞是常用于包装和扩増病毒载体的工具细胞，因此做好293T细胞的培 养，为保证相关实验的正常进行提供必要条件。 2适用范围本部门293T细胞培养 3操作方法 3.1将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75cm’新的细胞培养瓶放于生物安全 柜中，按照生物安全柜的标准操作规程，将生物安全柜的紫外开启半小时。 3. 2将含10%胎牛血清和lOOU/ml双抗的DMEM及PBS放于37°C水浴锅中预热。 3. 2.1将已长到80%-90%的293T细胞培养瓶从37°C, 5%的CO：：培养箱中取出，先用75% 的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中，用无菌的移液管吸净其 中的培养基，加5ml的预热的PBS洗涤一次，吸净PBS, 3. 2. 2将含EDTA-O. 25%tyption用PBS稀释两陪到五倍，向该75cm的细胞瓶中加入 3ml稀释好的EDTA-O. 25%tyption,让其充分平铺于细咆表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放 在显微镜下观察，直到细胞变圆，加含10%胎牛血清的DMEM终止反应，用移液管轻轻 将瓶上的细胞吹下，将细胞液移到15ml无菌的离心管中，lOOOrpm离心3分钟。 3.2.3将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释升，取一定量的细咆液进行n倍稀释后计数，按照细胞 计数标准操作规程进行。 3.2.4计数好之后细胞传代密度按照25X10*个细胞/cm进行传代培养，每个75c静的 培养瓶中加1 OmlDNEM培养基，放于37C, 5%的CO,培养箱中培养。 3. 2. 524小时后观察细胞状态，待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。