生化实验课件：Km值测定.pptVIP

* 碱性磷酸酶 AKP(Alkaline phosphatase)Km 值的测定 Vmax V [S] Km Vmax/2 Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 原理： 在其他因素不变的情况下，底物浓度对 反应速度的影响呈矩形双曲线关系。 ① 双曲线作图法： 即根据米-曼氏方程，以v 对[s]作图，Vmax/2 时 [s]即为Km，以摩尔浓度表示。 Vmax V [S] Km Vmax/2 因为实验条件下，底物 浓度很难使酶达到饱和，实测Vmax 是个近似值， 因而Vmax/2 不精确。此 外的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制。故此法少用。 ②双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 -1/Km 1/Vmax 1/[S] 1/V Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 以“1/v”对“1/[s]”作图，直线与x 轴交点 即为-1/Km。 磷酸苯二钠+H2O AKP 苯酚 + Na2HPO4 4-氨基安替比林 + 碱性 K2Fe(CN)6 红色醌衍生物 颜色深浅与酚含量成正比,从而可知酶活性的高低。以底物浓度 的倒数为横坐标