生化实验课件：分光光度法（医本）.pptVIP

分光光度法 如何求被测物质的含量 1.利用标准管计算测定物的含量 2.利用标准曲线计算测定物含量 3.利用标准系数法求出待测溶液的浓度 4.利用消光系数法求出待测溶液的浓度 1.利用标准管计算测定物的含量 在相同条件下测定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），同时也测定末知浓度（CU）的吸光度（AU）， 2.利用标准曲线计算测定物含量 先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测出它们的吸光度。然后以各管吸光度（A）为纵坐标，各管的浓度（C）为横坐标，在方格坐标纸上作图。 若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然得到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线。以后对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。 1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，即空白对照吸光度为“0”，测定待测样品的吸光度值。 722分光光度计使用的注意事项 比色杯应持其侧壁的毛玻璃面。 盛液时达到比色杯的2/3即可，不能太满，外壁如有液体，只能用滤纸沾去水份，再用擦镜纸擦干净。 测毕，比色液一般应倒回原试管中，直至计算无误后方可倒掉