生化实验课件：DNA提取与电泳 2014.pptVIP

实验一 组织细胞中基因组DNA的提取 实验二 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段（水平潜水式） 实验一 原理 样品研磨或者匀浆后加入细胞核裂解液， 1、首先在强去污剂或者和蛋白酶K协同下裂解细胞释放出基因组DNA； 2、接着加入RNase A去除RNA； 3、然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白； 4、最后纯净的DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。 操作步骤 1、600μl冰预冷的细胞核裂解液加入10-20mg新鲜组织用小匀浆器匀浆10s，将裂解物转入1.5ml EP管 ； (4ml) 2、将裂解物放置在65℃水浴10min； 3、冷却，加入Rnase A(10mg/ml) 1.8μl至裂解物中裂解物中至终浓度30μg/ml，颠倒混匀，37℃温育10min去除残留RNA；室温冷却； 4、裂解物中加入200μl 蛋白沉淀液，涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25s，然后冰浴3min； 5、13,000rpm离心5min; 6、小心缓慢吸取600ul上清到一个新的1.5ml EP管中，勿吸动沉淀； 7、加入等体积的室温异丙醇（约600 μl ），颠倒30次混匀或直到出现棉絮状（丝状）白色DNA沉淀，12,000rpm离心1min； 8、弃上清液，加入1ml 70%乙醇后，颠倒漂洗DNA沉淀，12,000rpm离心1min，弃上清液，倒置在吸水纸上轻敲几下，