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葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元 欧志敏
lowbar;葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元lowbar;欧志敏
药 物 生 物 技 术
Pharm aceutical Biotechno logy 2021, 16(5) :443～446443
β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元
欧志敏, 杨根生
(浙江工业大学药学院, 杭州 310014)
摘 要 采用β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元。产率和反应初速度随β-葡萄糖苷酶用量的增多而提高。最佳水解反应条件为35℃,pH 5. 0, 40h 。产率随着牛蒡子苷初始浓度的提高而降低。在最佳反应V C
条件下,β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷的过程符合单底物M ichaelis M enten 方程, v m s , 其中:
K m +C s
V m =2. 5×10-2mmol /L ·h , K m =3. 8×10-1mmol /L 。关键词 β-葡萄糖苷酶; 牛蒡子苷; 牛蒡子苷元
中图分类号:Q 503 文献标识码:A 文章编号:1005-8915(2021) 05-0443-04
牛蒡子苷元是中药牛蒡子的有效成分之一, 具
有治疗或预防慢性肾功能衰竭及肾纤维化、抗病毒、抗肿瘤等功效[1～7]。从天然牛蒡子中可以分离提取牛蒡子苷元, 由于牛蒡子苷元在牛蒡子中含量低于1%,所以该方法收率低。牛蒡子苷的糖苷键断裂可以生成牛蒡子苷元, β-葡萄糖苷酶可以水解糖苷键, 因此采用β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷可以生成牛蒡子苷元(图1) 。作者对β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元的工艺过程进行研究, 为牛蒡子苷元的制备提供了可靠方法
和上海融禾医药科技发展有限公司。β-葡萄糖苷酶(≥6u /mg ) 购自上海楷洋生物技术销售公司。其他试剂为分析纯。安捷伦高效液相色谱1200, 泵的型号为G1311A , 检测器的型号为G1365B 。
1. 2 β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元
分别用pH 3. 0、4. 0、5. 0、6. 0和7. 0的磷酸缓冲液配制浓度为0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3. 0m mol /L 的牛蒡子苷水溶液, 取20m l 牛蒡子苷溶液加入一定量的β-葡萄糖苷酶, 于一定温度的150r /min 摇床中转化一定时间。反应结束后, 精密加入8倍体积的甲醇终止反应, 放置过夜, 过滤取滤液, 经过0. 45μm 微孔滤膜过滤后得到的溶液用液相色谱分析牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量(方法1. 3) 。1. 3 牛蒡子苷和牛蒡子苷元的分析检测
色谱柱为Aglient Eclipse XDB -C8柱
Fig 1 P reparation o f ar ctigenin by hy drolyzatio n of arctii with β-g lucosidase
(4. 6mm ×150mm , 5μm ) 。检测条件:甲醇∶水=1∶1. 1, 体积流量∶1. 0ml /min , 进样量∶1μl , 紫外检测波长∶280nm , 柱温:30℃。标准品色谱图如图2。牛蒡子苷的标准曲线方程为Y =-0. 00459+9. 27356×10-4X , R =0. 99983。牛蒡子苷元的标准曲线方程为Y =0. 002+0. 00183X , R =0. 99987。
1 实验材料与方法1. 1 仪器与试剂
牛蒡子苷(纯度98%) 和牛蒡子苷元(纯度98%) 分别购自中国药品生物制品检定所
＊收稿日期:2021-01-07 修回日期:2021-03-02
基金项目:浙江省中医药科技计划项目(No . 2021CA100) 。作者简介:欧志敏, 女, 1973年生, 博士, 副教授。
, T :(0571(; E ooz zmm . cn 。
药物生物技术第16卷第5期
明40h 后酶的活力降低不利于反应进行。40h 内β-葡萄糖苷酶没有发生明显的失活现象, 因此最佳反应时间确定为40h 。25m g β-葡萄糖苷酶用于转化, 40h 产率达到79. 8%。2. 2 反应液的pH 值对产率的影响
在pH3. 0、4. 0、5. 0、6. 0和7. 0的磷酸缓冲液
A :Arctiin (2. 048min ) ; B :Arctigenin (3. 591min )
配制的20m l 0. 6mm ol /L 牛蒡子苷溶液中加入25mg β-葡萄糖苷酶, 于35℃、150r /min 摇床中反应40
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