4微生物工程第四章发酵工业的无菌技术.pptxVIP

第 四 章;一、基本概念 二、发酵工业污染的防治策略 三、发酵工业的无菌技术 四、培养基及设备管道灭菌 五、空气除菌; 灭菌(sterilization):用化学或物理方法杀死物料或设备中所有生命物质的过程。 消毒(disinfection):用物理或化学方法杀死空气、地表以及容器和器具表面的微生物。 除菌(degermation): 用过滤方法除去空气或液体中的微生物及其孢子。 防腐(antisepsis): 用物理或化学方法杀死或抑制微生物的生长和繁殖 。;消毒与灭菌的区别 消毒：表面微生物，只能杀死营养细胞 杀菌：所有生命体 消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒：发酵车间环境、设备、器具的无菌处理 灭菌：培养基等物料的无菌处理;（一）污染的危害 （二）杂菌污染的防治 ;消耗营养； 合成非目的产物，菌体自溶、发粘等造成分离困难等； 改变体系pH值； 杂菌分解目的产物； 噬菌体对细菌发酵破坏极大。;A．细菌 谷氨酸：发酵周期短，培养基不太丰富，较少染杂菌，但噬菌体威胁大。 肌苷：缺陷型生产菌，培养基丰富，易染菌，营养成分迅速被消耗，严重抑制菌生长和合成代谢产物。;B. 霉菌 PenG：青霉素水解酶上升，PenG迅速破坏，发酵一无所获。 柠檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染菌。 C. 酵母菌 易污染细菌以及野生酵母菌 D. 疫苗 无论污染的是活菌、死菌或内外毒素，都应全部废弃。;青霉素：怕染细短产气杆菌 链霉素：怕染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌 四环素：怕染双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌 柠檬酸：怕染青霉菌 肌苷（酸）：怕染芽孢杆菌 谷氨酸：怕染噬菌体，易造成连续污染;种子扩大时期染菌 灭菌后弃去 发酵前期染菌 应迅速重新灭菌，补充必要的营养成分，重新接种;发酵中期染菌 挽救困难，应早发现，应根据各种发酵的特点和具体情况尽快处理 。 抗生素发酵 输入正常发酵的另一罐发酵液; 柠檬酸发酵 a. 污染细菌：加大通风，加速产酸；加入盐酸等条pH3.0以下，抑制细菌 b. 污染酵母：加入0.025~0.035g/L CuSO4抑制酵母；通风加大，加速产酸。 c.染黄曲霉：加入另一罐将近发酵成熟的醪液，pH下降，黄曲霉自溶。 d.青霉菌：在pH很低下能够生长。提前放罐。;发酵后期污染 染菌量不太多，可继续发酵 污染严重，则提前放罐 杀菌剂的添加：前期无必要，增加成本； 发现后加入，效果要具体评价;丝状菌发酵被产酸菌污染：pH不断下降，菌丝大量自溶，发酵液粘度黏度增加，过滤困难 处理方法：①将发酵液加热后再加助滤剂； ②先加絮凝剂使蛋白质凝聚后沉淀 杂菌分泌较多蛋白质杂质时，使水相和溶媒之间极易发生乳化。;显微镜检查法 平板划线培养或斜面培养检查法 肉汤培养检查法 发酵过程的异常现象判断 溶解氧水平异常变化 pH异常变化 尾气中CO2异常变化 其他异常现象（黏度、泡沫、颜色等）;;主要原因： ①?种子带菌 ② 空气带菌 ③ 设备渗漏 ④ 灭菌不彻底 ⑤ 操作失误 ⑥ 技术管理不善;从污染杂菌的种类分析； 从污染时间进行分析； 从染菌的程度进行分析。;（1）种子带菌的防治 培养基及器具彻底灭菌 避免菌种在移接过程中受污染 避免菌种在培养及保藏过程中污染;（2）过滤空气带菌及其防治;（3）设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治; ;灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法;;法兰连接不当造成的“死角” ;（4）培养基与设备灭菌不彻底的防治;采取哪些措施能够保持无菌发酵？;三、发酵工业的无菌技术——灭菌方法;四、发酵培养基及设备管道灭菌;定义：微生物对热的抵抗力称为热阻，即指微生物在某一特定条件下（温度）的致死时间。 相对热阻：指某一微生物在某一条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间之比。;;大肠杆菌在不同温度下 的残留曲线;某些微生物受热死亡的速率不符合对数残留定律：如一些微生物芽孢。 Nt/N0=kR/(kR-kS) [exp(kst)-ks/kR exp(-kRt)] NR：耐热性活芽孢数；Ns：敏感性活芽孢数 ND：死亡的芽孢数； N0：初始活芽孢数。 kR：耐热性芽孢的比死亡速率； ks：敏感性芽孢的比死亡速率；;在T相同时，对数与非对数定律的灭菌时间t不同。;微生物死亡与培养物质受热破坏都可看作一级反应： 式中C：对热不稳定物质的浓度；k’：分解速度常数； k’的变化也遵循阿累尼乌斯方程：