PTSD大鼠海马神经元凋亡的变化及规律.docVIP

PTSD大鼠海马神经元凋亡的变化及规律 工作液。PBS洗涤载玻片3次后，加入50～100uL DAB底物，室温放置10min。PBS洗涤载玻片3次，除去多余底物后，苏木素复染数s，自来水冲洗2min，盐酸酒精分化2s，自来水冲洗2min，室温下依次用50%、70%、85%、95%梯度酒精脱水2min。二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下分析样本。 3.3 海马神经元凋亡率的计算 在400倍光学显微镜下随机取海马区5个不重叠视野，数出相应视野内神经元细胞数和凋亡阳性细胞数。细胞凋亡率=凋亡阳性细胞数/神经元细胞总数。 3.4 统计学处理 统计结果用均数士标准差表示，用SPSS 13.0对两组数据进行t检验，P4 实验结果 TUNEL阳性细胞核固缩颜色呈黄色或黄褐色，细胞体积缩小，有细胞凋亡的特征。对照组出现较少的神经元凋亡细胞（Ⅰ组9.74+0.88、Ⅱ组9.66+1.23），实验组出现较多的神经元凋亡细胞（Ⅲ组20.1+1.04、Ⅳ组19.7+1.53）。PTSD实验组大鼠TUNEL阳性细胞率明显高于对照组，并具有统计学意义（P5 讨论 实验选用成年雄性Wistar大鼠是由于其属于封闭群大鼠，具有无特定病原体、繁殖力强、性格温顺、对传染病抵抗力强、头部较宽阔等特点，有利于饲养、实验操作及结果观察，为PTSD的研究建立接近临床患者情况的动物模型。本实验在SPS之后随即对大鼠进行足底电击是改良后的单一连续应激建模方法，足底电击是将大鼠放在一个有电板的隔离空间内，通过电板导电对大鼠产生电刺激，足底电击可以产生较高强度的应激反应。TUNEL是检测细胞凋亡的常用方法，常用的切片方法为石蜡切片，由于石蜡切片加热操作等过程可导致细胞损伤，增加了细胞凋亡的假阳性，但本实验应用蛋白酶K溶液透明降低了组织样本对TUNEL的敏感性，并且石蜡切片具有可切薄片、易于保存等优点，因此成为实验中应用最普遍的方法之一。 細胞凋亡又称程序性细胞死亡，是一种不同于细胞病理性死亡的生理性变化过程。细胞在发生凋亡时，会在生理生化及细胞形态上发生一系列变化。随着地震、洪水等自然灾害和车祸等人为灾害的增多，创伤后应激障碍越来越多的出现在人类的社会生活之中，但治疗效果一直不容乐观，因而对PTSD发病机制的研究已经成为当今医学界研究的热点之一。有研究表明：PTSD可导致海马区神经元结构及功能发生变化，但机制尚不清楚。多篇研究显示：在PTSD中海马体的损伤及形态结构、细胞学变化与患者及动物模型的病理改变密切相关提示，在PTSD发病过程中，海马部位神经细胞存在凋亡的病理改变。但截止到目前，PTSD详细发病机制仍未被确切阐明。本实验通过TUNEL方法对PTSD大鼠海马区细胞凋亡情况进行检测，结果表明，PTSD大鼠海马神经元细胞凋亡率高于对照组，揭示了海马区神经元细胞凋亡可能与PTSD发病机制有密切关系，为PTSD发病过程中海马区结构及功能变化的机制研究提供实验依据。 参考文献 [1] 劳伦·B.阿洛伊，汤震宇，邱鹤飞，杨茜，等.变态心理学[M].上海：上海社会科学院出版社，2005. [2] S.Nolen-Hoeksema.变态心理学与心理治疗（第三版）[M].北京：世界图书出版公司，2005. [3] Barlow H.Danid，刘兴华，黄铮，徐凯文，等.心理障碍临床手册（第三版）[M].北京：中国轻工业出版社，2004. [4] 袁辉.PTSD样大鼠海马神经元凋亡及LTP，ACP变化的研究[D].中国医科大学，2008. [5] 朱承.创伤后应激障碍患者海马体积及代谢物水平的在体研究[D].汕头大学，2008. [6] 黄泉智，孙智高，许成勇，等.舒郁宁心汤对抑郁模型大鼠行为及海马形态结构的影响[J].中国中医急症，2011，20（80）. [7] 孟群.免疫组织化学染色要求及注意事项[J].肿瘤学杂志，2011，17（3）. [8] 包新民，舒斯云.大鼠脑立体定位图谱[M].北京：人民卫生出版社，1991. [9] 唐璇，张智博，陈本阳.参芪注射液对脑缺血再灌注大鼠的神经元保护作用[J].现代生物医学进展，2009，4（9）. [10] 黄攀，王然，王金甜，等.应激动物模型的构建及应用[J].畜牧与兽医，2016，48（3）. [11] 陈志胜，计慧琴，王丙云.冰冻和石蜡切片对TUNEL染色结果的影响[J].中国病理生理杂志，2005，21（9）. [12] 高超，华子春.细胞凋亡检测方法新进展[J].中国细胞生物学学报，2011，33（5）. [13] 刘虹，韩芳，石玉秀.创伤后应激障碍大鼠海马神经元凋亡中Caspase-12的表达[J].解剖学报，2014，45（4）. [14] 王海涛，刘昊，徐爱军，等.创伤后应激障碍大鼠海马和杏仁核中神经元凋亡及Caspase