实验总维生素C的测定—二硝基苯肼比色法.docx

实验总维生素c的测定—二硝基苯朋1比色法 The following text is amended on 12 November 2020. 实验：总维生素C的测定一2, 4-二硝基苯臍比色法 一、 实验目的 了解天然维生素C的结构功能以及天然存在形式。 掌握测定总维生素C的原理与方法。 二、 实验原理 总抗坏血酸包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古龙糖酸。样品中还原型抗坏血酸经 活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2, 4 -二硝基苯麟作用生成红色臊。臊在硫酸 溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，由此通过比色可对样品中总坏血酸进行定 量。 三、 仪器和试剂 仪器：恒温水浴锅（37±0.5°C）、紫外-可见分光光度计、组织捣碎机。 试剂：本实验用水均为蒸憎水，试剂纯度均为分析纯。 1、 4. 5mol/L硫酸：小心将250mL硫酸（比重1. 84）加入到700mL水中，冷却后用 水稀释至lOOOmLo 2、 （9+1）硫酸：小心将900mL硫酸（比重1. 84）加入到100mL水中,搅拌均匀。 3、 2% 2, 4-二硝基苯腓溶液（20g/L2, 4 -二硝基苯麟溶液）:溶解2g 2, 4 -二 硝基苯月井于lOOmL 4. 5mol/L硫酸内，过滤使用（不用时存于冰箱内，每次用前过 滤）o4 滤）o 4、2%草酸溶液（20g/L草酸溶液）: 溶解20g草酸（H2C2Oa ）于700mL水中，再加水 稀释至lOOOmL。 5、1%草酸溶液（10g/L草酸溶液）:稀释500mL 2%草酸溶液到lOOOmLc 5、 1%草酸溶液（10g/L草酸溶液）: 稀释500mL 2%草酸溶液到lOOOmLc 6、 1%硫服溶液（10g/L硫服溶液）: 溶解5g硫服于500mL 1%草酸溶液中。 8、 2%硫服溶液（2Og/L硫服溶液）: lmol/L盐酸：取100mL盐酸, 溶解10g硫脈F 500mL 1%草酸溶液中° 加入水中，并稀释至1200mLo 抗坏血酸标准浴液（Img/mL）:溶解lOOmg纯抗坏血酸于lOOmL 1%草酸中。 10、活性炭:将100g活性炭加到750mL lmol/L盐酸中，水浴回流1-2上过滤, 用水洗数次，至滤液中无铁离子（?」）为止，然后置于litre烘箱中烘干。 检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氤化钾（20g/L亚铁氤化钾）与 1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。 四、操作步骤 （全部实验过程应避光） （一）样品的测定 L浸提: 鲜样的制备：称100g鲜样和100g 2%草酸溶液（20g/L草酸溶液），倒入捣碎机中 打成匀浆，取10-40g匀浆（含1-2與 抗坏血酸）倒入lOOmL容量瓶中，用1%草酸 溶液（10g/L草酸溶液）稀释至刻度，混匀。 将浸提液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过 滤，备用。 干样制备：称1-4g干样（含l-2mg抗坏血酸）放入乳钵内，加入1%草酸溶液 （10g/L草酸溶液）磨成匀浆，倒入lOOmL容量瓶内，用1%草酸溶液（10g/L草酸溶 液）稀释至刻度，混匀。 将浸提液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾岀上清液，过 滤，备用。 氧化处理： 取25mL上述滤液，加入2g活性炭，振摇Imin,过滤，弃去最初数毫升滤液。取 10mL此氧化提取液，加入10mL 2%硫脈溶液（20g/L硫服溶液），混匀（得到样品 氧化液’）。 呈色反应： 编号 1 2 3 样品氧化液/ml 4 4 4  2% 2, 4 -二硝基苯月井溶液/ml — 1 1 加盖在37±0.5BC水浴保温3h, 3h后取出，除空白管外，所有试管放入冰 水中 2% 2, 4 -二硝基苯月井溶液/ml 1 — 1号管在室温中放置10?15min后放入冰水内 （9+1）硫酸/ml （边加边摇动试管滴加时间至少 需要Imin） S 5 5 硫酸滴加完毕，将试管自冰水中取出，在室温准确放置30min显色 4.比色 用1cm比色杯，以空白液调零点，于500nm波长测吸光值。 （二）标准曲线绘制 1、加2g活性炭于50mL标准溶液中，摇动1 min,过滤。 2、 取lOmL滤液放入500mL容量瓶中，加5.0g硫脈，用1%草酸溶液（10g/L草酸 溶液）稀释至刻度（抗坏血酸浓度20ug/mL） o 3、 取5, 10, 20, 25, 40, 50, 60稀释液，分别放入7个100mL容量瓶中，用1% 硫服溶液（10g/L硫源溶液）稀释至刻度，（最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为 1, 2, 4, 5, 8, 10, 12 Mg/mL）按样品测定步骤形成腺并比色。 4、 以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（卩g/mL）为横坐标绘制标准曲线。 x=^xF