实验一 质粒DNA的提取.pptVIP

实验目的 实验原理 实验仪器、材料与试剂 实验步骤 实验结果及讨论 实验目的 了解碱法提取质粒的原理； 掌握碱法提取质粒的方法； 掌握DNA琼脂糖电泳的原理和方法。 实验原理 质粒是一种细菌染色体外的、具有自主复制能力的、共价闭合环状超螺旋结构的小型DNA分子。碱裂解法提取质粒是实验室常用的方法。 这种方法是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。 结构的三大要素： 多克隆位点 选择标记（耐药性，LacZ） 独立的复制单位 种类： 质粒 噬菌体 酵母人工染色体（YAC） 反转录病毒载体 表达载体等 pET-32a Vector The pET System is the most powerful system yet developed for the cloning and expression of recombinant proteins in E. coli. pET-32 cloning/expression region Vector (pET-32a) Gene fragment (SmPR10) pET-32a-SmPR10 质粒的分离是利用质粒DNA与染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。 当菌体在NaOH和SDS溶液(碱性条件pH 12