原位杂交技术.pptxVIP

中心法则免疫组织化学？核酸分子原位杂交一、核酸分子原位杂交的基本概念(一)定义用已标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸中的互补序列杂交, 从而对组织细胞中的核酸进行定性、定位和相对定量分析。 简称原位杂交碱基互补配对原理(二) 基本原理加热变性酶显色反应杂交反应酶标记的抗探针标记物的抗体带标记物的探针(三)DNA变性(denaturation)定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开 成两条单链的过程。方法：过量酸、碱、加热、变性试剂如尿素、 甲酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。本质是双链间氢键的断裂热变性熔解温度(, Tm)变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，双链DNA变性一半所需要的温度称为DNA的解链温度，又称熔解温度, Tm)。其大小与G+C含量成正比。解链曲线Tm=（G+C）%×0.41+69.3DNA复性 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复双螺旋构象，这一现象称为复性。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，又称为退火。复性RNADNA二、探针（probe）(一)定义：是含有互补顺序的外源性被标记的DNA或RNA片段，是在原位杂交中用于检测细胞内特定DNA或RNA顺序定位的特殊试剂，探针的碱基序列是已知的，只能与特定的核酸分子结合上(二)探针的分类根据探针的核酸性质分为 DNA探针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针、寡核苷酸探针 1.