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【目的】 ：掌握 BCA 法测定蛋白质浓度的原理。
【原理】 ：
BCA(bicinchonininc acid) 与二价铜离子的硫酸铜等其他 试剂 组成的 试剂 ，混合一起即成为苹果
2+ +
绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下， BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu 还原为 Cu ，
+
一个 Cu 螯合二个 BCA 分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度
与蛋白质浓度成正比。
【操作】
标准曲线的绘制：取试管七支、编号，按下表操作：
【计算】
（一） 绘制标准曲线。
（二） 以测定管吸光度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度 (g/L) 。
（三） 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者， 求出待测血清中蛋白质浓度 (g/L) 。
【优缺点】
(一 ) 操作简单，快速， 45 分钟内完成测定，比经典的 Lowary 法快 4 倍且更加方便；
(二 ) 准确灵敏， 试剂稳定性好， BCA 试剂的蛋白质测定范围是 20-200 μ g/ml 微量， BCA 测定
范围在 0.5-10 μ g/ml 。
(三 ) 经济实用，除试管外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量；
( 四 ) 抗试剂干扰能力比较强，如去垢剂，尿素等均无影响
精品
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【器材】
（一） 7220 型分光光度计
（二） 恒温水浴箱
（三） 中试管 7 支
（四） 枪式移液管
【试剂】
1、 试剂 A ： 1％ BCA 二钠盐
2 ％无水碳酸钠
0.16% 酒石酸钠
0.4 ％氢氧化钠
0.95 ％碳酸氢钠
混合调 PH 值至 11.25 。
2 、 试剂 B ： 4 ％硫酸铜。
3 、 BCA 工作液：试剂 A 100ml ＋ 试剂 B 2ml 混合。
4 、 蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成 1.5mg/ml 的蛋白质
标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）
5 、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。
此法测定蛋白质浓度，近些年被科研工作者广泛选用。目前 BCA 法的试剂盒市面有售。
总之，虽然蛋白质含量的测定方法很多， 但是， 还没有一个完美的方法。 在选择测定方法时，
可根据实验要求和实验室条件决定。
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
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