细胞生物学研究方式.pptVIP

第三章 细胞生物学研究方法;显微镜---细胞学说 电子显微镜与分子生物学结合，细胞生物学才能有今天的发展。 结构与功能（动态特征）； 细胞的生命活动 ； 实验科学与实验技术——细胞真知源于实验室;第一节 细胞形态结构的观察方法;一、光学显微镜技术（light microscopy);;光学和电子显微镜成像原理 不管是何种显微镜，镜像的形成都需要三个基本要素: ①照明系统， ②被观察的样品， ③聚焦和成像的透镜系统。;透射;●焦距与角孔径 焦距(focal length)是透镜的中心平面到???点的距离，而角孔径(angular aperture)是光从样品进入显微镜的物镜半角α，因此角孔径实际表示有多少光离开样品通过透镜。 ;;分辨率: 透镜最重要的性质就是它的分辨率，分辨率(R)可用以下公式计算: R = 0.61 λ/n Sinα 其中:n=聚光镜和物镜之间介质的折射率. 空气为1. 油为1.5; α=样品对物镜角孔径的半角，sinα的最大值为1;λ=照明光源的波长。0.61是一个恒定的参数，表示成像的点虽被重叠但仍能被区别的程度。 从上式可知，角孔径越大，进入物镜的光越多；介质的折射率越大，则数值孔径越大，这些都可以使分辨率提高。由于分辨率表示的是能够区别两个点间最近距离的能力，所以R值越小，分辨率越高。从分辨率的表达式来看，或者波长越短，分辨率越高。?;分辨极限(limit resolution)与放大率(magnification);增大角孔径或缩短波长可提高光学显微镜的分辨率。如果用波长比普通波长短得多的电子波代替光波，分辨率可大大提高，电子显微镜就是在这种需求下被发明的。 表 电子显微镜与光学显微镜的基本区别 ;1、 常用的光学显微镜;普通双筒显微镜;基本构造：光学放大系统、照明系统、机械和支架系统;;荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy）;细胞生物学研究方式;荧光显微镜原理;细胞生物学研究方式; 相差显微镜(phase contrast microscope) 相差显微镜在结构上进行了特别设计，尤其是光学系统有很大的不同，可用于观察未染色的活细胞。 相差显微镜是能将物体本身的相位差转换为振幅差的显微镜。在普通光镜下观察标本时，是靠颜色（波长）和亮度（振幅）的差别而看到被检物体的结构，而活细胞近于无色透明，光波通过不吸收光，振幅变化不大，故人眼感觉不到，为解决这一难题，30年代（1934—1935）荷兰物理学家Zernike设计制造出相差显微镜，并用此而获1953年诺贝尔奖。;相差显微镜的光学部件及光线通路;;■ 暗视野显微镜(dark field microscope); 暗视野显微镜的光学;倒置显微镜;细胞生物学研究方式;光学显微镜的样品制备与观察;;;;染色(staining) 大多数细胞总重量的70%是水，对可见光几乎是透明的，只有很少的内含物不透光。染色的目的就是给细胞的不同组分带上可区别的颜色特征。 19世纪初，发现某些有机染料可染生物组织，并对细胞特殊部位的着色具有选择性。如苏木精对负电荷分子有亲和性，能显示出细胞内核酸的分布；酸性染料如伊红可使细胞质染色；苏丹染料在脂肪中的溶解度比在乙醇中大，所以苏丹染料的乙醇饱和溶液能使脂肪着色。但对许多染料的特异性染色机理尚不清楚。? ;激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy）;细胞生物学研究方式;2、电子显微镜技术 自从第一台电子显微镜在德国诞生以来，取得飞跃发展并在生物学领域中得到广泛的应用。 利用电镜可以观察到各种病毒的形态结构以及细胞器的微细结构，还能观察到许多生物大分子。 目前的电镜已由单纯的形态描述进入了成分分析、定性和定量分析。 此外，将电镜与计算机连用，对图象进行信息处理也取得了很大进展。 总之，电镜已成为研究生物学的有力工具，必将发挥越来越大的作用。;1932年德国学者Max Knolls和Ernst Ruska发明了第一台电子显微镜，开拓了超微世界，发现了许多光镜下看不到的结构，如细胞膜、线粒体、细胞核、高尔基体、中心粒等细胞器的细微结构。 将在光学显微镜中观察不到而只能在电子显微镜下观察的结构称为亚显微结构(submicroscope structure)， 或超微结构(ultrastructure)。 在种类上，电镜可分为两大类:透射电子显微镜和扫描电子显微镜。;电镜与光镜的比较;透射电子显微镜(TEM);电镜(透射电镜)与光镜光路图比较;电子显微镜的基本构造; 扫描式电子显微镜 1940年，英国剑桥大学首先试制成