第七章 免疫诊断试剂原理（酶联免疫分析法）.pdfVIP

第七章酶联免疫分析法 ·基本要求: ·了解免疫分析发展史，掌握抗原、抗体和免疫反应的 原理，了解免疫分析法的分类，熟悉晦标记免疫分析 法中使用的酶，熟悉ELISA的原理，掌握ELISA的固相 载体、包被与封闭、稀释液、洗涤液、自每反应终止液 及ELISA法常用酶的底物系统，掌握ELISA的酶联方法 和试验方法，熟悉ELISA反应条件的选择，掌握ELISA 的定量计算，了解ELISA 的灵敏度提高途径，熟悉 ELISA放大系统。了解化学发光分析的原理，熟悉化 学发光剂的种类，熟悉化学发光晦联免疫分析常用的 标记峰和发光增强剂，熟悉生物发光晦联免疫分析常 用的生物发光反应体系。 第七章酶联免疫分析法 第一节目每联免疫分析概述 第二节光度降联免疫分析 第二节发光晦联免疫分析 第一节酶联免疫分析概述 一、免疫分析 1 、免疫分析发展史 ·免疫分析 (Immunoassay ， IA) 是利用待测物质 (抗 原或抗体)与其相对应物质 (抗体或抗原)之间专一 特异性反应而建立起来的一种高选择性分析方法。 ·免疫分析主要基于用抗体 (或抗原)作为选择性化学 试剂以分析测定抗原 (或抗体)及半抗原O ·宋代 人工疫苗预防烈性传染病天花 • 1971 年 第一届国际免疫学会议将免疫学与微生物 学分开发展成一门独立的学科。 第一节酶联免疫分析概述 免疫( immuni ty) 一词源于 immuni tas ， 原 意是免除税赋和差役。 ·研究早期免疫学多集中在抗体抗感染能力研究。 • 20世纪中期以后，人们逐渐开始对各种抗原、微生物 的作用进行研究，发展出基础免疫学、临床免疫学、 免疫学检测、医学免疫学等多个分支。 ·现代免疫学将免疫定义为: 机体对自己和 异己 识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和 正常情况下是维持内环境稳定的一种生理性功能。 第一节酶联免疫分析概述 2 、抗原、抗体与免疫反应 ·抗原是能够引起免疫反应的分子。 ·免疫原性 ( immunogenici ty )指诱导刺激免疫系统产 生抗体或致敏淋巳细胞的能力。 ·具有免疫原性的物质称为免疫原 ( immunogen )。 ·免疫反应原性 ( immunoreactivity) 或 抗原性 ( antigenici ty) ，指能与相应抗体或致敏淋巳细胞发 生特异性结合，引起免疫反应的性能。 ·具备上述两种特性的物质为完全抗原，仅具有免疫反 应性的物质被称为半抗原 ( hapten) 0 第一节酶联免疫分析概述 ·抗体是能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 ·所有的抗体都是免疫球蛋白，但并非所有的免疫球蛋 白都是抗体。 ·例如元免疫活性的免疫球蛋白(如骨髓瘤蛋白)就不 是抗体，尽管其结构与抗体相似。 ·抗体主要存在于血清内 ，但在其他体液及外分泌液中 也有存在。 ·抗原抗体分子之间存在着结构互补性和亲和性，使得 抗原与相应抗体之间极易发生结合反应，这种反应具 有高特异性 (即专一性)和可逆性。 第一节酶联免疫分析概述 ·抗原、抗体发生如下免疫反应: • Ag+Ab •-• Ag-Ab ·该免疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学 基本原理，其反应式为 [地- Ag] 二 ι二 K [Ab][Ag] k 2 : [Ab] 为游离的抗体结合位点的浓度; [Ag] 为游 ·式中 离的抗原结合位点的浓度; [Ab-Ag] 为抗原-抗体复合 物的浓度; k 为正反应速率常数;鸟为负反应速率常 1 数 ; K为反应平衡常数 ( 亲和常数)。 第一节酶联免疫分析概述 ·这种抗原-抗体反应既可发生于体内 (in vivo)