血红蛋白的提取和分离2.pptx

㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）1、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法2、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）3、原理：3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快D4、具体过程㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：学生活动2: 1、什么是凝胶？ 2、什么是凝胶色谱法？3、凝胶色谱法的原理是什么？4、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不同蛋白质的具体过程。相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B㈡ 缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制（ ）对溶液（ ）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱pH值3、缓冲溶液的配制通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－2使用比例在不同PH范围内4、在本课题中使用的缓冲液？磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究其(活性)。思考：说出人体血液中缓冲液。 NaH2PO4 / Na2HPO4H2CO3 / NaHCO3（三） 电泳：1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。2.原理：3.类型:琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动琼脂糖凝胶电泳示意图 4、聚丙稀酰胺凝胶电泳（1）聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N，亚甲基双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。（2）原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入SDS。 4、聚丙稀酰胺凝胶电泳（3）SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳作用机理:SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A 电荷的多少B 分子的大小C 肽链的多少D 分子形状的差异二、实验操作：样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。（2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。样品处理 血液组成成分 4.透析血红蛋白2.释放血红蛋白 1.洗 涤 红 细 胞 3.分离血红蛋白 粗 分 离纯 化纯度鉴定二、实验操作血浆红细胞2条β-肽链 2条α-肽链血细胞血红蛋白亚铁血红素课题3 血红蛋白的提取与分离血液组成成分阅读思考：血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多，红细胞的含量最高的有机化合物是_____________。该化合物是由 _____________和____________构成的