液相色谱法分离几种酸性化合物的探究.docVIP

液相色谱法分离几种酸性化合物的探究金敬鹏 王嘉希 蔡文静王志强 唐晓彤武汉 武汉大学化学与分子科学学院430072 摘要：建立了用HPLC分离硫骡、苯卬酸、水杨酸、对氨基水杨酸、对疑基苯叩酸等五种 物质的分离条件，即40%体积甲醇与60%体积磷酸缓冲液，其中磷酸缓冲液为1 mol/L, pH 为3.0,淋洗剂最终pH3.5,在反向键合硅胶柱为固定相，以230nm为检测波长，得到了较 好的分离效果。并讨论了优化条件实验结果的影响。 关键词：高效液相色谱法芳香族竣酸优化条件 Abstract： build up the HPLC separation for thiourea, benzoic acid, salicylic acid, p-hydroxide benzoic acid, p-amino salicylic acid to alcohol and their separation conditions, witch is 40% volume methanol and 60% volume phosphate buffer, including phosphate buffer 1 mol/L, pH 3.0, and drench lotion final pH lower than 3.5, in reverse bonded silica gel column for stationary phase, with 230nm wavelength for detection and finally obtained a good separation effect. Whats more, discussed the optimization condition for the influence of experimental results? 芳香族竣酸的应用领域非常广泛，在许多药品、食品以及化妆品中都含有一定彊的一 种或多种芳香族竣酸或其衍生物。但因其存在毒害性，对其在相关产品中的用量有严格的规 定，为了满足制造工艺及控制质量的要求，须了解产品中各种芳香酸的实际含量，因此，建 立准确、简便的芳香族竣酸的分析方法十分必要。木实验通过对五种物质的分离，提供了一 种可行的方案。 方法概述： 目前，文献报道分析芳香族竣酸的方法主要有气相色谱法(Gas Chromatography, GC), 离子色谱法(Ion Chromatography, IC),离子排斥色谱法(Ion-Exclusion Chromatography, IEC), 毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis, CE),高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography , HPLC)以及高效液相色谱一质谱联用法(High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrum, HPLC?Ms)⑴。本实验采用较为广泛的 HPLC 法。 1.1高效液相色谱法：高效液相色谱法同时具备分离效率高、灵敏度高和重现性好等优 点，应用比较广泛。在近年的文献中多有报道，具有较好的应用前景。 1?2条件控制：对色谱法而言，条件选择及其控制极为重要，高效液相色谱法屮，分离 效杲受多种因索影响上要冇： 紫外检测波长的选择：芳香竣酸由于苯环的存在通常在紫外波段具有较好的吸收， 硫嫌在此区域也存在吸收，故实验采用此外吸收检测器。但市于竣酸种类不同，导致各物质 在具体吸收谱图存在差异，采用不同的吸收波长将会有不同的实验效果。 流动相与固定相的选择：色谱法的重点在于用不同的流动相和固定相使样品分离， 即各物质在固定相?流动相的分配比例，本实验中捉供018反向键合硅胶柱，不在探讨范 围内，实验流动相主要成分为甲醇-水体系，通过极性的改变而改变各成分保留值。 流动相pH值的选择：由于本实验主要分离竣酸类物质，都具有一定酸性，不同pH 环境下将有不同程度的解离，从而有不同的保留现象，这点在优化实验方案中极为重要。实 际实验过程中，用磷酸盐缓冲体系代替水调节pH,找到垠佳条件。市于用磷酸缓冲体系代 替水，改变比例时将会使pH随Z改变，故实际上两个条件同时改变。 1.3实验药品均为分析纯，配成5mg/mL甲醇溶液作为母液。 实验内容 由于实验时间的限制，本实验未能采用控制变量的方法逐步确定最佳实验条件，由以 上分析，采川逐步优化的方法，也得到了令人满意的结果。 2?1检测波长：由参考文献的实验结果，改254nm的检测波长为230nmo 2.2流动相条件优化： 初步调节：初始条件为甲醇-水90:10的中性溶液，对氨基水杨酸O.lmg/mL,对轻基 苯甲酸0.02mg/m