重组基因导入受体细胞.pptVIP

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2021-08-09 发布于广东
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重组基因导入受体细胞.ppt

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第五章重组基因导入受体细胞;第一节受体细胞;;关于细菌的感受态本质与存在;;转化反应;;一、原核生物细胞;; ;;;;;;;第二节重组DNA分子转入受体细胞;;;;;Ca2+诱导的大肠杆菌转化法;;;;;;DNA分子进入大肠杆菌受体细胞的机制 ;;电穿孔转化法;;三亲本杂交接合转化大肠杆菌;;;;转化率的计算及其影响因素 ;;影响转化率的因素;;;(二)重组λ噬菌体DNA分子转导大肠杆菌 ;;;λ噬菌体DNA体外包装的主要过程;;;二、受体细胞的选择 ;①限制与修饰系统;②重组系统 ;③易于转化或转导;④有明显的选择性差异;⑤感染寄生缺陷型;第三节重组子的筛选;;一、遗传表型直接筛选;;（1）抗药性筛选; 当带有完整抗药性基因的载体转化无抗药性细胞后，凡转入载体的细胞都获得了抗药性，能在含有相应药物的琼脂平板上生长成菌落，而未被转化的宿主细胞不能生长。;根据载体抗药性标志插入失活选择含有两个以上的抗药基因的载体，外源DNA片段插入其中一个基因，并导致这个基因的失活，就可用两个含不同药物的平板，互相对照，筛选含重组DNA的菌落，这就是插入失活效应。;;;;（3）插入表达筛选法;（4）显色互补筛选法;;;;;;