原代肾细胞制备.pptVIP

本实验使用的液体 ⑴ PBS ⑵生长液 10%小牛血清（CS) P.S 用5.6% NaHCO3 调 PH 至 7.2-7.4 ⑶维持液 小牛血清（CS) 2% P.S 用5.6% NaHCO3 调 PH 至 7.2-7.4 ① 断颈法处死鼠，把整个动物放入75%酒精的烧杯中数秒，背部向上固定在解剖台。戴口罩及手套等，皮肤消毒（碘伏)，解剖取肾(取双侧肾）。将肾放入无菌平皿中。处理解剖用具(鼠扔塑料袋中，解剖台及使用过的用具放讲台）。 ②将移入无菌平皿中的肾，用PBS液洗两次（用无菌无刻度吸管）。③在平皿中将肾剪碎成1-2mm3大小组织块，用PBS液洗2-3次（用无刻度吸管轻轻吸液),移入50ml 烧瓶中。④上述烧瓶中加10ml PBS液，再加入5 ml 0.5%胰蛋白酶（已量好）重悬沉淀，混合，封好口，标记姓名。37℃水浴 15-20 min分钟(棉絮状为最佳）。 ⑤轻移烧瓶，吸去上清（尽量吸尽），加10ml生长液，用无刻度吸管反复吹打，分散。 ⑥滤网过滤，至无菌平皿，用无刻度吸管移入培养瓶内（必要时加点生长液，标记姓名和班级（在侧面）。 ⑦孵箱培养 培养 72 小时后首次换液，以后每两天换液一次。