复苏冻存细胞.pptVIP

原代肾细胞培养(二) --观察细胞 结果观察 ①有无污染（是否浑浊，或有颗粒样物质） 常见污染病原体:细菌,支原体,真菌 常见污染原因: 取材 环境 操作 ②是否形成单层 ③细胞形态 ※如果有杂质看不清细胞，先换维持液（上次课配制的）后观察。 (1)从液氮中取出冻存的细胞，夹住上端，立即放入37℃水浴中快速解冻。 （2）1000rp/10 离心5 分钟。 （3）无菌操作下开瓶，弃上清液。加生长液（在大离心管中）约1ml轻轻悬浮细胞团（洗） ，移入离心管中，混匀。 1000rp/10 离心5 分钟。 （4）无菌操作下开瓶，弃上清液。 加1ml PBS 液悬浮，0.9ml移入含0.4% 台盼兰 100ul 管中（做死细胞鉴定）。染10-15分，细胞计数。 加生长液（在培养瓶中）约1ml轻轻悬浮细胞团，移入到培养瓶中， 轻轻混匀。加10ml生长液，培养。 （这一步不做） 解冻冷冻保存细胞(细胞复苏） （1）解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂。要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入37℃水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。（2）快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1 分钟内全部融化（不