细胞生物学：实验六 微丝的染色及形态观察.pptVIP

实验六 微丝的染色及形态观察 实验目的 1. 了解动物细胞骨架的基本形态。 2. 掌握考马斯亮蓝R250染细胞骨架微丝的方法。 实验原理 真核细胞细胞骨架荧光染色图（630×） 红色:微丝; 绿色: 微管; 蓝色: 细胞核. 细胞骨架： 微管----不稳定 微丝----形成较粗的应力纤维（40nm） 中间纤维---太细 { 考马斯亮蓝 R250 是一个经典的蛋白染料，没有特异性，可以结合任何蛋白。 实验步骤 小鼠成纤维细胞（Mouse’s fibroblasts）在体外呈贴壁生长，事先接种到含有玻璃片的培养板中，细胞会粘附到玻璃片上 。 小鼠成纤维细胞图（400×） 该细胞应力纤维发达，纤维常与细胞的长轴平行并横跨整个细胞，是最佳的实验材料！ 1) 1 ml 6mmol/L PBS 浸泡1 min 2) 1 ml 1% Triton X-100 37℃ 孵育20 min 3) 1 ml M 缓冲液浸泡 2 min (稳定骨架蛋白) 4) 1 ml 3% 戊二醛处理 15 min (固定蛋白) 5) 1 ml 6mmol/L PBS浸泡 2 min 6)