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2021年用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告 2021年用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告 PAGE / NUMPAGES 2021年用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告 用正交法测定多个原因对酶活力影响 一、 序言 正交试验法 正交试验法就是利用排列整齐表- 正交表来对试验进行整体设计、 综合比较、 统计分析, 实现经过少数试验次数找到很好生产条件, 以达成最高生产工艺效果。正交表能够在原因改变范围内均衡抽样, 使每次试验都含有较强代表性, 因为正交表含有均衡分散特点, 确保了全方面试验一些要求, 这些试验往往能够很好或愈加好达成试验目。 正交试验设计包含两部分内容:第一, 是怎样安排试验;第二, 是怎样分析试验结果。 酶活力 酶活力（enzyme activity）也称为 酶活性, 是指 酶催化一定 化学反应能力。酶活力大小可用在一定条件下, 酶催化某一 化学反应速度来表示, 酶催化 反应速度愈大, 酶活力愈高, 反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定 酶促反应速度。 酶促反应速度可用单位时间内、 单位 体积中底物降低许或产物增加量来表示。在通常酶促反应体系中, 底物往往是过量, 测定初速度时, 底物降低许占总量极少部分, 不易正确检测, 而产物则是从无到有, 只要测定方法灵敏, 就可正确测定。 二、 试验目 1.学习并掌握正交法应用原理。 2.采取正交法测定多个原因对酶活力影响。 三、 试验原理 酶促反应常常同时受到多个原因(包含激活剂和抑制剂等)交互影响, 可采取正交法进行综合研究, 即经过少许试验收到愈加好效果: 多快好省。本试验以正交法同时测定[S]、 [E]、 温度和pH值对trypsin活性影响, 以求得酶活最大时对应影响原因最好值(水平), 并借此初步掌握正交法使用。 四、 试验器材和试剂 试验器材: ①试管 ②漏斗 ③温度计 ④吸管 ⑤恒温水浴锅 ⑥分光光度计 试验试剂: ①2%血红蛋白液(Hb) ②15%三氯醋酸液(TCA) ③trypsin酶液 ④0.04mol/L巴比妥缓冲 液(pH 7, 8, 9) ⑤考马斯亮蓝染液  五、 试验操作 1.试验设计 本试验为四原因三水平(总试验次数34=81), 可选择L9正交表（仅需9次试验), 展开后其特征为均衡搭配 （1）每列中水平数1、 2、 3出现次数相同, 均为3次; （2）每两列横行数对(1-1/1-2/…/3-2/3-3)各出现一次。 列号 试验号 1 2 3 4 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 2.将各原因及其对应水平参数依次填入得到试验安排表 试验号 试剂/ml 1 6 8 2 4 9 3 5 7 2%血红蛋白液 0.2 0.5 0.8 0.2 0.5 0.8 0.2 0.5 0.8 缓冲溶液 pH7 2.6 pH8 1.7 pH9 1.7 pH8 2.3 pH9 2.3 pH7 2.0 pH9 2.0 pH7 2.0 pH8 2.0 37℃预温5min 50℃预温5min 60℃预温5min 酶液 0.2 0.8 0.5 0.5 0.2 0.8 0.8 0.5 0.2 37℃反应10min 50℃反应10min 60℃反应10min （1）各试管编号, 分别加入对应容量底物(2% Hb)和对应pH值缓冲液, 混匀; （2）同温处理3支试管同时预温5min; （3）各试管依序分别加入对应容量trypsin酶液(统一加样时间间隔), 混匀; （4）同温处理3支试管置对应恒温水浴中反应10min; （5）各试管依次加入15%三氯醋酸液2ml, 混匀以终止反应; （6）非酶促对照: 另取一试管, 先加入2%血红蛋白液0.5ml及pH8缓冲液2.0ml, 再加15%三氯醋酸液2.0ml, 混匀静置10min后再加入酶液0.5ml; （7）上述各管反应液室温静置15min后过滤, 取滤液待测酶活; （8）酶活测定(考马斯亮蓝法, 标准曲线制备略): 取试管若干支编号, 分别加入对应样品滤液1.0ml及考马斯亮蓝液4.0ml, 混匀, 室温静置3min, 以非酶促对照管为空白, 于波长595nm比色测定。 3.数据统计及分析 将各管测定所得光密度值对应填入表格, 分别算出各原因一、 二及三水平试验结果总和Ⅰ、 Ⅱ和Ⅲ, 并分别取其平均值计算对应极差(各列中最大与最小值之差); 比较各原因极差大小以评定各原因对酶活影响, 并对酶活最高时各原因水平作一直观分析。 六、 试验结果及数据处理 1.试验数据: