输水情景下白洋淀好氧反硝化菌群落对溶解性有机物的响应.docxVIP

输水情景下白洋淀好氧反硝化菌群落对溶解性有机物的响应.docx

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输水情景下白洋淀好氧反硝化菌群落对溶解性有机物的响应 好氧反硝化不仅可以在同一系统中完成硝化和反硝化的过程,同时还能利用反硝化过程产生的碱中和硝化过程产生的酸。因此,好氧反硝化逐渐成为生物脱氮的研究热点 然而,目前关于好氧反硝化菌的分析大多集中于分离鉴定和实验室的脱氮特性分析 白洋淀作为雄安新区的核心水体,是新区建设的重要生态屏障。为恢复白洋淀的生态功能,河北省统筹调度了黄河水、南水北调水、上游水库水以及再生水等多种水源对白洋淀进行了生态输水。本文选取冬季输水期白洋淀典型区域的水体样品,通过研究该时期水体好氧反硝化菌群落分布特征和关键物种;并结合溶解性有机物组分的分析,来研究输水情景下好氧反硝化菌群落对溶解性有机物的响应,以期为将来制定适应白洋淀冬季输水期水体特征的耐低温好氧反硝化菌筛选的碳源选择提供必要的技术支持。 1 材料与方法 1.1 研究区域与样品采集 结合研究者的文献资料和白洋淀的历史承载功能 其中,河口区承接上游入淀河流的来水,主要包括白沟引河(BGYH, 水库水)、萍河(PH, 水库水)、瀑河(BH, 南水北调水)、府河(FH, 保定再生水)、唐河(TH, 南水北调和水库水)和潴龙河(ZLH, 黄河水);自然区包括藻苲淀(ZZD);旅游区为白洋淀主要观赏景点、承接游客的区域,主要包括文化苑(WHY)、鸳鸯岛(YYD)和烧车淀(SCD);养殖区主要包括端村(DC)和鲥鯸淀(SHD);生活区主要包括捞王淀(LWD)、平阳淀(PYD)和枣林庄(ZLZ)。同时依据河流输水的影响程度,将白洋淀分为河口区和内部区(自然区、旅游区、养殖区和生活区)。本研究于2020年1月(生态输水期)对白洋淀进行取样,用纯水清洗过的聚乙烯瓶采集各采样点5L中层水样,冷藏避光运回实验室,用于分析水体好氧反硝化菌群落分布和溶解性有机物特征。其中,水样用0.45μm醋酸纤维滤膜过滤后进行光谱测定,3d内测定完成。 1.2 DNA提取与PCR扩增 本文利用0.22μm醋酸纤维滤膜过滤水样,将滤膜送至测序公司进行水体总DNA样本的提取。通过引物F: 5-TGGACVATGGGYTTYAAYC-3和R: 5- ACYTCRCGHGCVGTRCCRCA-3)对水体的 1.3 溶解性有机物测定及分析 利用紫外-可见分光光度计(DR6000,美国)和荧光分光光度计(F-7000,日本)测量过滤水样的紫外-可见吸收光谱和三维荧光光谱,具体测定参数设定参见文献[28, 29]执行。采用 1.4 生物信息分析 利用R进行好氧反硝化菌的生物信息学分析(/)。具体分析如下,通过Chao1指数来表征好氧反硝化菌的丰度 2 结果与分析 2.1 水体溶解性有机物分析 从 通过平行因子分析得出4种荧光组分(图3):组分C1( 荧光区域积分解析的5种组分的分布情况如图4所示,河口区和内部区的各个组分同样在统计学上都不存在显著差异。其中类蛋白物质(P1、P2和P4)都呈现出内部区占比高于河口区的特征,类腐殖质物质(P3和P5)呈现出河口区高的特征。荧光区域积分的结果与平行因子解析出荧光组分的情况相一致。 与此同时,分布对紫外可见光谱[图4(f)]、平行因子分析组分[图4(g)]和荧光区域积分组分[图4(h)]进行了PCoA分析。基于紫外可见光谱的PCoA分析显示,前两轴共解释了总体变化的88.94%,河口区与内部区呈现显著差异(Adonis, 2.2 微生物 如表2所示,依据历史功能划分来看,自然区的Chao1指数最高,其次为旅游区和生活区,最后为河口区和养殖区,表明自然区的好氧反硝化菌微生物群落的丰富度最高;依据河口区和内部区划分,内部区的Chao1指数(2184.37±323.35)高于河口区(1815.93±260.70)。各个采样点的Simpson和Shannon指数中,养殖区和河口区较高,自然区最低;内部区的Simpson和Shannon指数要低于河口区。各个采样点间覆盖度指数大于0.99,显示出各样本测序深度能够很好的覆盖物种信息。综上,白洋淀河口区与内部区的好氧反硝化菌群落丰富度和多样性存在一定差异。 2.3好氧反硝化菌群落组成 该时期各个采样点的好氧反硝化菌主要属于变形菌门(Protebacterice)和未分类(Unclassified_bacteria),其中变形菌门为第一大门类,占比为39.34%~57.92%;未分类菌达到41.93%~60.54%。变形菌门中, 基于属水平对该时期的好氧反硝化菌进行了PCoA分析[图7(a)],结果显示PCoA1和PCoA2分别解释了总体变化的53.65%和18.1%,其中PCoA起主要作用。在河口区和内部区的划分角度来看,不存在统计学上的显著差异;ZLH、BGYH和FH采样

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