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2021年动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告 2021年动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告 PAGE / NUMPAGES 2021年动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告 动物肝脏中DNA提取及检测 一、 序言 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核酸（DNA, 为英文Deoxyribonucleic?acid缩写）, 又称去氧核糖核酸, 是脱氧核糖核酸染色体关键化学成份, 同时也是组成基因材料。有时也被称为“遗传微粒”, 原因是在繁殖过程中, 父代会把它们自己DNA一部分复制传输到子代中, 从而完成性状传输。 DNA是高分子聚合物, DNA溶液为高分子溶液, 含有很高粘度, 可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用, 利用这一特征, 能够对DNA进行含量测定。当核酸变性时, 吸光度升高, 称为增色效应; 当变性核酸重新复性时, 吸光度又会恢复到原来水平。较高温度、 有机溶剂、 酸碱试剂、 尿素、 酰胺等都能够引发DNA分子变性, 即DNA双链碱基间氢键断裂, 双螺旋结构解开—也称为DNA解螺旋。 在细胞内, DNA能与蛋白质结合形成染色体, 整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言, 正常体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制, 细胞分裂间期又可划分为: G1期-DNA合成前期、 S期-DNA合成期、 G2-DNA合成后期。对于真核生物, 如动物、 植物及真菌而言, 染色体关键存在于细胞核内; 而对于原核生物, 如细菌而言, 则关键存在于细胞质中拟核内。染色体上染色质蛋白, 如组织蛋白, 能够将DNA进行组织并压缩, 以帮助DNA与其她蛋白质进行交互作用, 进而调整基因转录。 脱氧核糖核酸结构 DNA结构: DNA结构通常可划分为一级结构、 二级结构、 三级结构和四级结构四个水平。 DNA是一个长链聚合物, 组成单位为四种脱氧核苷酸, 即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、 胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、 胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、 鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连, 组成其长链骨架, 排列在外侧, 四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里其中一个相连, 这些碱基沿着DNA长链所排列而成序列, 可组成遗传密码, 指导蛋白质合成。读取密码过程称为转录, 是以DNA双链中一条单链为模板转录出一段称为mRNA（信使RNA）核酸分子。 DNA是由很多脱氧核苷酸按一定碱基次序相互用3’, 5’-磷酸二酯键相连组成长链。大多数DNA含有两条这么长链, 也有DNA为单链, 如大肠杆菌噬菌体φX174、 G4、 M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在一些类型DNA中, 5-甲基胞嘧啶可在一定程度内替换胞嘧啶, 其中小麦胚DNA5-甲基胞嘧啶尤其丰富。在一些噬菌体中, 5-羟甲基胞嘧啶替换了胞嘧啶。40年代后期, 查加夫（E.Chargaff）发觉不一样物种DNA碱基组成不一样, 但其中腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T）, 鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C）, 所以嘌呤数之和等于嘧啶数之和, 通常见多个层次描绘DNA结构。 浓盐法从动物组织中提取DNA 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）形式存在, 其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液, 但在0.14 M盐溶液中溶解度很低, 而RNP则可溶于低盐溶液, 所以可利用不一样浓度NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质, 用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清, 加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。 肝脏细胞 肝脏是由肝细胞组成, 肝细胞极小, 肉眼看不到, 必需经过显微镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞, 5000个肝细胞组成一个肝小叶, 所以人肝肝小叶总数约有50万个。肝细胞为多角形, 直径约为20-30/加(微米), 有6-8个面, 不一样生理条件下大小有差异, 如饥饿时肝细胞体积变大。每个肝细胞表面可分为窦状隙面、 肝细胞面和 胆小管面三种。肝细胞里面含有许很多多复杂细微结构:如肝细胞核、 肝细胞质、 线粒体、 内质网、 溶酶体、 高尔基氏体、 微粒体及饮液泡等组成。 二、 试验目 1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA原理与技术 三、 试验原理 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）形式存在, 其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液, 但在0.14 M盐溶液中溶解度很低, 而RNP则可溶于低盐溶液, 所以可利用不一样浓度NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。 将抽提得到DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质, 用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清, 加入冷乙醇即可将其